Ректальный ротор: Доступ к нашему сервису временно запрещён!

Содержание

АмплиСенс COVID-19-FL

Номер по каталогу

Наименование

Количество тестов

Форма комплектации

Состав формы

Дополнительно к форме комплектации требуется заказывать реагенты

НK1-4091-1-1

АмплиСенс® COVID-19-FL

100

 

Форма 1 (экстракция РНК, обратная транскрипция, амплификация кДНК и детекция)

«РИБО-преп»

«ПЦР-комплект»

Не требуется (входят в состав набора)

НK3-4093-1-1

АмплиСенс® COVID-19-FL

100

Форма 3 (экстракция РНК, обратная транскрипция, амплификация кДНК и детекция)

«МАГНО-сорб» «ПЦР-комплект»

Не требуется (входят в состав набора)

Срок годности набора реагентов 12 месяцев.

Минимальный гарантированный срок годности наборов при отгрузке со склада в Москве – не менее 40% от полного срока годности.

Клинический материал

  • мазки со слизистой оболочки носо- и ротоглотки (при наличии симптомов поражения верхних дыхательных путей)
  • мокрота либо аспират из зева (при наличии симптомов поражения нижних дыхательных путей)
  • бронхоальвеолярный лаваж либо промывные воды бронхов (при наличии симптомов поражения нижних дыхательных путей)
  • плазма крови
  • фекальный либо ректальный мазок (при наличии симптомов поражения ЖКТ)
  • аутопсийный материал

Для транспортировки и хранения клинического материала потребуется:

Кат. №

Наименование

Форма

959

«Транспортная среда для хранения и транспортировки респираторных мазков»

Форма 1 (100 пробирок объемом 0,5 мл)

958

«Транспортная среда для хранения и транспортировки респираторных мазков»

Форма 3 (1 флакон объемом 100 мл)

Для предобработки мокроты и аспиратов из зева может потребоваться реагент:

Кат.

Наименование

Форма

180

«МУКОЛИЗИН»

Форма 1 (2 флакона объемом 100 мл)

 

Контроли

При проведении ПЦР-исследования проводится контроль эффективности экстракции НК и прохождения ПЦР.

Амплификаторы с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени»

Програмируемые амплификаторы должны иметь не менее 2 независимых каналов флуоресцентной детекции:

  • Rotor-Gene 6000, Corbett Research, Австралия,
  • Rotor-Gene Q, Qiagen GmbH Германия,
  • ДТ-96, ДТпрайм, НПО ДНК-Технология», Россия,
  • CFX96, Bio-Rad Laboratories, Inc., США.

 

Аналитические характеристики

Аналитическая чувствительность:

  • 5х102 ГЭ/мл (геномных эквивалентов (ГЭ) возбудителя в 1 мл пробы) — мазки со слизистой оболочки носо- и ротоглотки, бронхоальвеолярный лаваж / промывные воды бронхов
  • 1х103 ГЭ/мл (геномных эквивалентов (ГЭ) возбудителя в 1 мл пробы) — мокрота / аспират из зева, плазма крови, фекальный либо ректальный мазок, аутопсийный материал

Диапазон измерения:

  • 5х102 — 3х108 ГЭ/мл (геномных эквивалентов (ГЭ) возбудителя в 1 мл пробы) — мазки со слизистой оболочки носо- и ротоглотки, бронхоальвеолярный лаваж / промывные воды бронхов
  • 5х103 — 3х108 ГЭ/мл (геномных эквивалентов (ГЭ) возбудителя в 1 мл пробы) — мокрота / аспират из зева, аутопсийный материал
  • 1х104 — 3х108 ГЭ/мл (геномных эквивалентов (ГЭ) возбудителя в 1 мл пробы) — плазма крови, фекальный либо ректальный мазок

 

Диагностические характеристики

  • Диагностическая чувствительность 100%
  • Диагностическая специфичность 100%
     

Запчасти к медтехнике

ИНГАЛЯТОР УЛЬТРАЗВУКОВОЙ РОТОР, РОТОР 2
         
           

Маска силиконовая детская

 

Маска силиконовая взрослая

  Маска капроновая
 цена 150 руб   цена 150 руб    Снята с производства
         
   
Носовая канюля детская   Носовая канюля взрослая   Камера распылительная в сборе
цена 40 руб   цена 40 руб   цена 1240 руб
         
   
Штуцер старого образца   Штуцер нового образца   Штуцер
цена 35 руб   цена 35 руб   цена 000 руб
         
   
Пьезокерамический элемент    Стакан камеры с крышкой    Стакан камеры с крышкой 
(D=19мм)   (пластик)
 
(поликарбонат)
цена  330 руб   цена 190 руб   цена 190 руб
         
     
 Резинка (прокладка)       Руководство ингалятора
 цена 000 руб
  цена  000 руб   цена 80 руб 
         
   
Плата управления    Плата управления    Плата управления 
ингалятора Ротор    ингалятора Ротор 2   портативного ингалятора
цена 000 руб   цена 000 руб   цена 000 руб
         
   
    Плата в вилку ингалятора    
цена 000 руб   цена 000 руб   цена 000 руб
         
         
КАТУНЬ ОБЛУЧАТЕЛЬ БАКТЕРИЦИДНЫЙ 
         
         
   
Очки защитные № 1   Очки защитные № 2   Очки защитные № 3
 цена 300 руб    цена 330 руб    цена 330 руб
         
   
 Лампа ДКБ-9 (G23)     Патрон (G23)     Дроссель Helvar
 цена 980  руб    цена 000  руб    цена 000  руб 
         
   
Лампа ДКБ-9 (2G11)   Патрон (2G11)   Балласт Feron
цена 980  руб    цена 000  руб     цена 000  руб 
         
   
Тубус для носа/уха    Тубус для горла    Тубус для миндалин 
цена  150 руб   цена  150 руб   цена  150 руб
         
   
Комплект тубусов для УФО   Экран \ Защитная шторка   Руководство УФО Катунь
цена  400 руб    цена 150 руб    цена  80 руб
         
       
Биодозиметр Горбачева   Корпус    Предохранитель 
цена 150 руб   цена 000 руб   цена 000 руб
         
         
УЛЬТРАТОН АМП 2ИНТ
         
         
   
Гайка для Ультратон АМП 2ИНТ   Гайка для Ультратон АМП 2ИНТ   Корпус держателя 
цена 150 руб   Снята с производства   цена 000 руб 
         
   
Катушка    Плата управления V2   Плата вилки питания
цена 000 руб   цена 000 руб   цена 000 руб
         
     
Регулятор мощности V2   Плата управления V1   Регулятор мощности V1
цена 000 руб   Снята с производства   Снят с производства
         
     
Корпус  V2   Корпус V1   Кнопка включения 
цена 000 руб   Снят с производства   цена 000 руб 
         
   
 Держатель электродов    Глазной электрод    Гребешковый  электрод
цена 100 руб   цена 400 руб    цена 400 руб
         
   
Грибовидный  электрод   Вагинальный электрод   Ректальный электрод
цена 370 руб    цена 380 руб    цена  380 руб
         
   
Рогатка (позвоночный)    Коленный электрод   Полосной электрод
цена 390 руб   цена 400 руб    цена  380 руб
         
   
Ушной электрод   Десенный электрод   Бородавочный электрод
цена 370 руб   цена 370 руб   цена  390 руб
         
   
Носовой электрод   Книга Ультратонотерапия    Поверхностный электрод 
цена 370 руб     цена 140 руб   Снят с производства 
         

Физиотерапевтический аппарат Ультратон-АМП-2ИНТ

Аппарат «Ультратон-АМП-2ИНТ» предназначен для воздействия в лечебных целях токами надтональной частоты (ТНЧ) по методу ультратонотерапии, введенному в физиотерапевтическую практику Д. А.Синицким (а.с. № 614796). По физическим характеристикам и по действию на организм метод близок к местной дарсонвализации, однако обладает более выраженным лечебным действием и меньшим раздражающим эффектом при проведении процедур. Основными действующими факторами ультратонотерапии являются синусоидальный высокочастотный ток, высоковольтный коронный разряд, тепло, выделяющееся в тканях организма и в области коронного разряда, незначительное количество озона и окисей азота.

Под влиянием ТНЧ усиливается местное кровообращение, повышается активность обменных процессов, уменьшаются застойные явления, боли, улучшается функциональное состояние нервно-сосудистой системы, проявляется бактерицидное и спазмолитическое действие. Наличие этих компонентов обеспечивает уникальное противовоспалительное действие аппарата.

Аппарат может быть использован в физиотерапевтических кабинетах лечебно-профилактических учреждений широкого профиля, в косметологической практике, спортивной медицине и в домашних условиях.

Комплект поставки: Прибор Ультратон АМП 2ИНТ

  1. вариант — 1 электрод (грибовидный)
  2. вариант — 3 электрода (грибовидный, ушной, десенный или носовой)
  3. вариант — 4 электродов (грибовидный, ушной, десенный или носовой, гребешок,)

Область применения

Дерматология — диатез, экзема, нейродермит, угревая сыпь, фурункулы, для выведения бородавок, лечение послеоперационных рубцов и повреждений кожи.

Стоматология — воспалительные заболевания челюстно-лицевой области, послеоперационные инфильтраты, артрит височно-нижнечелюстного сустава, пародонтоз.

Хирургия — местные гнойно-воспалительные процессы, инфицированные раны, трофические язвы, начальные стадии облитерирующих заболеваний сосудов конечностей.

Невропатология — невралгия, невриты, невралгические проявления остеохондроза позвоночника.

Отоларингология — гайморит, насморк, грипп, ринит.

Рефлексотерапия — аппарат может быть использован специалистами по рефлексотерапии для лечения внутренних болезней воздействием на акупунктурные точки и зоны Захарьина-Геда.

Косметология — аппарат может быть использован для лечения воспалений кожи, повышения ее эластичности (упругости), для предупреждения развития морщин, а также для предупреждения преждевременного выпадения волос.

Каталог продукции

Иммунобиологические препараты (вакцины профилактические)
тел.: (383) 363-47-00, доп. 28-34; факс: (383) 336-64-81, 336-74-09; E-mail: [email protected]
1 Вакцина коревая культуральная живая, 1 амп./1 доза, № 10 упак. 354,75 Гос. реестр
приказ от
04.06.2019 г.
№ 366/20-19
2 Растворитель для коревой и паротитной вакцин, 1 амп./0,5 мл, № 10 упак. 100,10
3 Вакцина коревая культуральная живая, 1 амп./2 дозы, № 10 упак. 709,50 Гос. реестр
приказ от
09.08.2019 г.
№ 548/20-19
4 Растворитель для коревой и паротитной вакцин, 1 амп./1,0 мл, № 10 упак. 200,20
5 Вакцина коревая культуральная живая, 1 амп./5 доз, № 10 упак. 1773,75 Гос. реестр
приказ от
09.08.2019 г.
№ 548/20-19
6 Растворитель для коревой и паротитной вакцин, 1 амп./2,5 мл, № 10 упак. 500,50
Культуры клеток
тел.: (383) 363-47-00, доп. 28-48, 28-34; факс: (383) 336-64-81, 336-74-09; E-mail: [email protected], [email protected]
1 Набор реагентов «Культуры клеток диплоидные человека и животных для вирусологии и биотехнологии» 10 млн 22 685,38
2 Набор реагентов «Культуры клеток перевиваемые человека и животных для вирусологии и биотехнологии» 10 млн 17 564,52
Питательные среды и растворы для культур клеток
тел. : (383) 363-47-00, доп. 24-41, 20-20; факс: (383) 336-64-81, 336-74-09; E-mail: [email protected], [email protected]
1 Питательная среда Игла МЕМ (без L-глутамина) фл. (450 мл) 407,00
2 Питательная среда Игла с двойным набором аминокислот и витаминов жидкая стерильная (без L-глутамина) фл. (450 мл) 468,00
3 Питательная среда 199 М жидкая стерильная (с L-глутамином) фл. (450 мл) 480,00
4 Питательная среда 199 М 5-ти кратная жидкая стерильная (с L-глутамином) фл. (450 мл) 1 032,00
5 Питательная среда 199 жидкая стерильная (с L-глутамином) фл. (450 мл) 462,00
6 Питательная среда RPMI 1640 (без L-глутамина) фл. (450 мл) 528,00
7 Питательная среда ДМЕМ жидкая стерильная (без L-глутамина) фл. (450 мл) 516,00
8 Питательная среда ДМЕМ/F-12 (1:1) жидкая стерильная (без L-глутамина) фл. (450 мл) 504,00
9 Питательная среда для культур клеток бессывороточная жидкая ВекторВак-ПС2 фл. (450 мл) 781,00
10 Версена раствор фл. (450 мл) 308,00
11 Хенкса раствор фл. (450 мл) 242,00
12 Эрла раствор фл. (450 мл) 276,00
13 Раствор Хенкса модифицированный 20-ти кратный фл. (450 мл) 1 200,00
14 Трипсин сухой стерильный для культур клеток фл. (1,125 г) 1 012,00
15 L-глутамин сухой стерильный фл. (150 мг) 99,00
16 Питательная среда 199 М, Игла МЕМ, DМЕМ, RPMI 1640, 199, DMEM/F-12 сухая нестерильная (комплект для приготовление 100 л жидкой среды) самовывоз компл. 15 000,00
17 Питательная среда 199 М, Игла МЕМ, DМЕМ, RPMI 1640, 199, DMEM/F-12 сухая нестерильная (комплект для приготовление 100 л жидкой среды) с отправкой компл. 15 360,00
18 Питательная среда 199 М, Игла МЕМ, DМЕМ, RPMI 1640, 199, DMEM/F-12 сухая нестерильная (комплект для приготовление 20 л жидкой среды) самовывоз компл. 3 000,00
19 Питательная среда 199 М, Игла МЕМ, DМЕМ, RPMI 1640, 199, DMEM/F-12 сухая нестерильная (комплект для приготовление 20 л жидкой среды) с отправкой компл. 3 360,00
20 АВК сухой для питательной среды 199 М, Игла МЕМ, DМЕМ, RPMI 1640, 199, DMEM/F-12 г 252,00
21 Раствор «Трансвект» для научных и лабораторных целей компл. 1 044,00
22 Раствор «Гемовект» л 840,00
Диагностические ИФА-тест-системы
тел. (383) 363-47-00 вн. 22-32, факс 336-74-09, E-mail: [email protected]
1 Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител классов G и М к вирусу гепатита С «Вектор ИФА ВГС-АТ скрин», (96 определений / 192 определения) набор По договоренности № РЗН 2014/2191
2 Набор реагентов для совместного и раздельного иммуноферментного выявления антител классов G и M к вирусу Эбола «Вектор ИФА Эбола-AT скрин», (96 определений) набор По договоренности № РЗН 2015/3458
Диагностические ПЦР тест-системы
тел. (383) 336-60-10, факс 336-74-09, E-mail: [email protected] nsc.ru
1 Набор реагентов для амплификации кДНК вируса Марбург с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени «Вектор-ПЦРРВ-Марбург-RG», (20 определений) набор По договоренности № РЗН 2013/1316
2 Набор реагентов для амплификации кДНК вируса Эбола (Заир, Судан) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (для приборов Rotor-Gene 6000/3000) «Вектор-ПЦРРВ-Эбола-RG», (20 определений) набор По договоренности № РЗН 2013/1322
3 Набор реагентов для амплификации кДНК вируса Ласса с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (для приборов Rotor-Gene 6000/3000) «Вектор-ПЦРРВ-Ласса-RG», (20 определений) набор По договоренности № РЗН 2013/1321
4 Набор реагентов для амплификации кДНК вируса Мачупо с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (для приборов Rotor-Gene 6000/3000) «Вектор-ПЦРРВ-Мачупо-RG», (20 определений) набор По договоренности № РЗН 2013/1320
5 Набор реагентов для выявления кДНК вируса желтой лихорадки методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Вектор-ПЦРРВ-YFV», (20 определений) набор По договоренности № РЗН 2017/6631
6 Набор реагентов для амплификации кДНК вируса денге (субтип 2) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (для приборов Rotor-Gene 6000/3000) «Вектор-ПЦРРВ-Денге2-RG», (20 определений) набор По договоренности № РЗН 2013/1315
7 Набор реагентов для амплификации к ДНК вируса денге (субтипов 1-4) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (для приборов Rotor-Gene 6000/3000) «Вектор-ПЦРРВ-Денге-RG», (20 определений) набор По договоренности № РЗН 2016/4633
Лабораторные животные
тел. : (383) 336-67-05, 363-47-00, доп. 27-02, 28-34; факс: (383) 336-67-05, 336-74-09; E-mail: [email protected]
1 Мышь нелинейная
до 10 г гол. 84,96 *
10-16 г гол. 92,04 *
16-22 г гол. 95,58 *
лактирующая с пометом гол. 302,08
2 Мышь линейная
до 10 г гол. 256,06 *
10-16 г гол. 276,12 *
16-22 г гол. 283,20 *
лактирующая с пометом гол. 726,88
3 Морская свинка
до 200 г гол. 697,38 **
200-300 г гол. 758,74 **
300-400 г гол. 767,00 **
свыше 400 г гол. 770,54 **
морская свинка беременная гол. 1 155,22
4 Крыса популяции «Wistar»
до 40 г гол. 377,60 ***
40-120 г гол. 476,72 ***
120-200 г гол. 494,42 ***
свыше 200 г гол. 510,94 ***
крыса популяции «Wistar» беременная гол. 758,74
5 Кролик
до 1,5 кг гол. 1 486,80 **
1,5-2,5 кг гол. 1 858,50 **
2,5-3,0 кг гол. 2 230,20 **
свыше 3,0 кг гол. 2 478,00 **
6 Кровь гуся мл 476,72
7 Кровь петуха мл 476,72
8 Кровь морской свинки мл 673,78
9 Кровь кролика мл 41,30

Цефекон-Д суппозитории ректальные (для детей) 50 мг №10

Краткое описание

Жаропонижающее, обезболивающее, противовоспалительное.Разовая доза составляет 10-15 мг/кг 2-3 раза в сутки через 4-6 ч. максимальная суточная доза парацетамола не должна превышать 60 мг/кг.Ректально, после очистительной клизмы или самопроизвольного опорожнения кишечника.

Один суппозиторий содержит:
Активное вещество:
Парацетамол ? 50 мг, 100 мг или 250 мг;
Основы для суппозиториев:
Жир твердый (витепсол, суппосир) ? до получения суппозитория массой 1,25 г.

Оказывает анальгезирующее и жаропонижающее действие. Блокирует циклооксигеназу в ЦНС, воздействуя на центры боли и терморегуляции. В очаге воспаления клеточные пероксидазы нейтрализуют влияние парацетамола на циклооксигеназу, что объясняет отсутствие значимого противовоспалительного действия. Препарат не оказывает отрицательного влияния на водно-электролитный обмен (не приводит к задержке натрия и воды) и слизистую оболочку ЖКТ.

Препарат предназначен к применению у детей в возрасте от 3 мес до 12 лет. У детей в возрасте от 1 до 3 мес возможно однократное применение препарата для снижения температуры после вакцинации (возможность применения препарата по другим показаниям решается врачом индивидуально). Применяют в качестве: — жаропонижающего средства при ОРВИ, гриппе, детских инфекциях, поствакцинальных реакциях и других состояниях, сопровождающихся повышением температуры тела; — анальгезирующего средства при болевом синдроме слабой и умеренной интенсивности, в т.ч.: головная боль, зубная боль, боли в мышцах, невралгии, боли при травмах и ожогах.

Препарат применяют ректально. Суппозитории вводят в прямую кишку ребенка после очистительной клизмы или самопроизвольного опорожнения кишечника. Режим дозирования устанавливают в зависимости от возраста и массы тела. Средняя разовая доза составляет 10-15 мг/кг массы тела ребенка. Препарат в разовой дозе вводят 2-3 раза/сут, через 4-6 ч. Максимальная суточная доза препарата не должна превышать 60 мг/кг массы тела.

Возраст Масса тела Разовая доза
1-3 мес 4-6 кг 1 супп. по 50 мг (50 мг)
3-12 мес 7-10 кг 1 супп. по 100 мг (100 мг)
от 1 года до 3 лет 11-16 кг 1-2 супп. по 100 мг (100-200 мг)
от 3 до 10 лет 17-30 кг 1 супп. по 250 мг (250 мг)
от 10 до 12 лет 31-35 кг 2 супп. по 250 мг (500 мг)
При применении препарата в качестве жаропонижающего средства длительность курса лечения составляет 3 дня; в качестве обезболивающего — 5 дней. При необходимости врач может продлить курс лечения.

Со стороны пищеварительной системы: возможны тошнота, рвота, боли в животе. Аллергические реакции: сыпь на коже и слизистых оболочках, зуд, крапивница, отек Квинке. Со стороны системы кроветворения: редко — анемия, тромбоцитопения, лейкопения, агранулоцитоз. При длительном применении в высоких дозах возможно развитие гепатотоксического и нефротоксического (интерстициальный нефрит и папиллярный некроз) действия, гемолитической анемии, апластической анемии, метгемоглобинемии, панцитопении.

— возраст до 1 месяца; — повышенная чувствительность к парацетамолу. С осторожностью применяют препарат при нарушениях функции печени и почек, синдроме Жильбера, Дубина-Джонсона, Ротора, заболеваниях системы крови (анемия, тромбоцитопения, лейкопения), дефицит фермента глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы.

Данные по передозировке препарата Цефекон Д не предоставлены.

Пациент должен быть предупрежден о необходимости обратиться к врачу при продолжении лихорадки более 3 дней и болевого синдрома более 5 дней. Следует избегать одновременного применения с другими парацетамолосодержащими препаратами, т.к. это может вызвать передозировку парацетамола. При применении препарата более 5-7 дней следует контролировать показатели периферической крови и функциональное состояние печени. Парацетамол искажает показатели лабораторных исследований при количественном определении глюкозы и мочевой кислоты в плазме.

Индукторы микросомального окисления в печени (фенитоин, этанол, барбитураты, флумецинол, рифампицин, фенилбутазон, трициклические антидепрессанты), этанол, гепатотоксичные лекарственные средства увеличивают продукцию гидроксилированных активных метаболитов, что обусловливает возможность развития тяжелой интоксикации даже при небольшой передозировке. Ингибиторы микросомального окисления (циметидин) снижают риск гепатотоксического действия. При приеме одновременно с салицилатами вероятность развития нефротоксического действия возрастает. При совместном применении с парацетамолом усиливаются токсические эффекты хлорамфеникола. При совместном применении с парацетамолом усиливается действие антикоагулянтов непрямого действия и снижается эффективность урикозурических средств.

class=»h4-mobile»>

Препарат следует хранить в сухом, недоступном для детей месте при температуре не выше 20°C. Срок годности — 2 года.

камеры изоляционные , лабораторная –подставка хирургическая операционная с подогревом и ЭКГ модулем, предназначенные для животных, весом от 50 до 300 грамм

ТС N RU Д-RU.АЛ16.В.48306

Ректальный электронный Зонд-Успокоитель для крупного рогатого скота,

Закрытое акционерное общество Научно-производственная компания «ТЕКО»

2019-02-16

9018

ТС N RU Д-IT.АУ04.В.12019

Оборудование электротехническое для ветеринарии: камеры изоляционные , лабораторная –подставка хирургическая операционная с подогревом и ЭКГ модулем, предназначенные для животных, весом от 50 до 300 грамм

2016-03-23

9018

ТС N RU Д-CN.АУ04.В.10718

Сканер радужной оболочки глаза: иридологическая камера

«EHANG Beauty Equipment Co., Ltd»

2016-03-10

9018

ТС N RU Д-DK.АУ37.В.12450

Оборудование электротехническое не бытового назначения,

«Jorgen Kruuse A/S»

2016-08-09

9018

ТС N RU Д-IT.АУ04.В.18139

Оборудование ветеринарное для анестезии, лабораторная -подставка хирургическая операционная с подогревом и модулем электрокардиографии (ЭКГ), установка переливания крови, предназначенные для животных, весом от 50 до 300 гр

2016-06-02

9018

ТС N RU Д-RU.АУ04.В.23204

Микротомы ротационные

Закрытое Акционерное Общество «ОРИОН МЕДИК»

2020-08-10

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.05142

КОМПЛЕКС аппаратно-программный для определения изменений электро-физиологических реакций организма «ВАЛЕОСКАН» в следующих модификациях: «850-А», «752-R», «DSAM», «725-R»,»800-F»

Общество с ограниченной ответственностью «Научно-производственное объединение «Диал» (ООО «НПО «Диал»)

2020-08-17

9018

ТС N RU Д-RU.РА01.В.15478

Стимулятор желудочно-кишечного тракта автономный биполярный импульсный СЖКТ-4-«Дюны»

ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО «МЕДИКО — ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ЦЕНТР «ДЮНЫ»

2020-05-21

9018

ТС N RU Д-DE.ОС01.В.04031

Устройство для шлифования зубов животных «Premium», устройство для шлифования зубов животных «ProPig»

2018-05-04

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.04229

«Аппарат ультразвуковой низкочастотный оториноларингологический для хирургического и консервативного лечения заболеваний ЛОР-органов «ТОНЗИЛЛОР-ММ»в комплекте с принадлежностями: 1.Блок управления-1шт., 2. Акустическая си

Общество с ограниченной ответственностью «Научно-производственное предприятие «МЕТРОМЕД» (ООО «НПП «МЕТРОМЕД»)

2020-04-20

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.04747

Аппарат комплексного одномоментного локального воздействия контрастными температурами и фонофорезом «ПРОЛОНГ-ММ» в составе: 1. Блок управления -1шт., 2. Термоаппликатор ТА-А -1шт., 3. Термоаппликатор ТА-Б — 1шт., 4. Ультр

Общество с ограниченной ответственностью «Научно-производственное предприятие «МЕТРОМЕД» (ООО «НПП «МЕТРОМЕД»)

2020-06-29

9018

ТС N RU Д-RU.АУ04.В.23202

Аппарат для гистологической обработки тканей

Закрытое Акционерное Общество «ОРИОН МЕДИК»

2020-08-10

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.05143

КОМПЛЕКС аппаратно-программный диагностический для определения изменений физиологического состояния организма «НТАК»

Общество с ограниченной ответственностью «Научно-производственное объединение «Диал» (ООО «НПО «Диал»)

2020-08-17

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.00414

Комплекс аппаратно-программный для сбора и обработки методом БОС информации об изменении электрофизиологических реакций организма «БОС-ЛАБ» в следующих исполнениях: с модулем БИ-012; с модулем БИ-02; с модулем БИ-02М; с мо

Общество с ограниченной ответственностью «Компьютерные системы биоуправления» ( ООО «КОМСИБ»)

2018-06-25

9018

ЕАЭС N RU Д-RU.АЯ79.В.09925

Комплекс озоно-ультразвуковой для хирургического лечения «ОНКОДЕСТ-ММ»

ООО «Научно-производственное предприятие «Метромед» (ООО «НПП «Метромед»)

9018

ЕАЭС N RU Д-RU.АУ04.В.71657

Ингалятор ультразвуковой индивидуальный для профилактики и лечения заболеваний органов дыхания аэрозолями лекарственных средств ИУИ – «Ротор», в следующих исполнениях:

Акционерное общество «Алтайский приборостроительный завод «Ротор»

9018

ЕАЭС N RU Д-RU.АЯ79.В.09407

«Аппарат ультразвуковой низкочастотный оториноларингологический для хирургического и консервативного лечения заболеваний ЛОР-органов «ТОНЗИЛЛОР-ММ»в комплекте с принадлежностями

ООО «Научно-производственное предприятие «Метромед» (ООО «НПП «Метромед»)

9018

ЕАЭС N RU Д-RU.АУ04.В.71661

Аппарат для лечения током надтональной частоты «Ультратон-АМП-2ИНТ» , в составе: — Ультратон-АМП-2ИНТ — 1 штука; — электрод грибовидный — 1 штука; — электрод ушной — 1 штука; — электрод десенный — 1 штука.

Акционерное общество «Алтайский приборостроительный завод «Ротор»

9018

ЕАЭС N RU Д-CH.АУ04.В.70962

Грелки электротерапевтические медицинские, моделей: FH 422, FH 300, FH 200C, FH 200, FH 100, FH 80

9018

ЕАЭС N RU Д-RU.АД77.В.06443

Оборудование медицинского назначения: эвакуатор дыма медицинский

«АЛКОМ медика»

9018

ЕАЭС N RU Д-US.АУ04.В.70060

I. Электрокардиографы ELI, варианты исполнения: ELI150c, ELI250c, ELI230. II. Принадлежности:

2017-05-20

9018

ЕАЭС N RU Д-DE.ЛД04.В.00826

Аппарат лазерный хирургический диодный Leonardo с принадлежностями: лазер медицинский диодный, Leonardo dual 45: тип Leonardo, модель dual 45. Лазер медицинский диодный Ceralas E 1470/15W/+/-30 nm, 400 nm

CeramOptec GmbH

2005-08-20

9018

ЕАЭС N RU Д-RU.АЖ22.В.01975

Урофлоуметр «УФМ-01 Яровит»

Общество с ограниченной ответственностью Яровит-ярь

2019-08-20

9018

ЕАЭС N RU Д-US.АУ04.В.69862

Нейростимулятор программируемый для стимуляции спинного мозга и периферических нервов Itrel 4, варианты исполнения: 1. Нейростимулятор программируемый для стимуляции спинного мозга и периферических нервов Itrel 4 модель

Medtronic Inc

2015-05-20

9018

ТС N RU Д-CN.АУ04.В.34685

Оборудование ветеринарное диагностическое, торговая марка «Armed»: Мониторы многофункциональные, модели PC-900B, PC-3000, UP-7000; Капнограф, модель PC-900A; Пульсоксиметр, модель PC-66V

Shenzhen Creative Industry Co., Ltd.

2004-02-20

9018

ТС N RU Д-RU.РА01.В.15218

Аппарат офтальмологический светодиодный «ВИРТУС»

ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО МЕДИКО — ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ЦЕНТР ДЮНЫ

2018-05-20

9018

ТС N RU Д-CN.АЛ33.В.03987

Иридологическая камера Digital Iris Analyzer EC- HM8, DM980US/2980150300138

EHANG Beauty Equipment Co.,Ltd

2021-01-20

9018

ТС N RU Д-RU.РА01.В.15492

Стимулятор желудочно-кишечного тракта автономный импульсный для эндогенной электрофототерапии СЖКТ-ФТ-«Дюны»

ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО МЕДИКО — ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ЦЕНТР ДЮНЫ

2021-05-20

9018

ТС N RU Д-RU.РА01.В.15495

Распылитель эфирных масел ультразвуковой «ЭфА»

ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО МЕДИКО — ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ЦЕНТР ДЮНЫ

2021-05-20

9018

ТС N RU Д-RU.РА01.В.15477

Аппараты для электропунктурной диагностики в двух исполнениях: «Дека-Фолль» и «Дека-Фолль-ПК»

ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО МЕДИКО — ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ЦЕНТР ДЮНЫ

2021-05-20

9018

ТС N RU Д-RU.АУ04.В.23203

Автомат для окраски мазков

Закрытое Акционерное Общество ОРИОН МЕДИК

2010-08-20

9018

ТС N RU Д-RU.АУ04.В.28080

Комплекс офтальмологический лечебно-диагностический

Закрытое Акционерное Общество ОРИОН МЕДИК

2025-10-20

9018

ТС N RU Д-RU.АУ04.В.23205

Термостаты для гистологии

Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная фирма Опус

2010-08-20

9018

ТС N RU Д-IT.АЛ16.В.40235

Оборудование ветеринарное для анестезии, лабораторная -подставка хирургическая операционная с подогревом и ЭКГ модулем, система переливания крови, предназначенные для животных, весом от 50 до 300 грамм

2015-09-20

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.00415

Комплекс аппаратно-программный с модулем “ПУЛЬС» (игровой приставкой) для лечения и реабилитации методом БОС. «БОС-ПУЛЬС» в составе: модуль «ПУЛЬС» 1 шт., программное обеспечение на компакт-диске 1 шт.

Общество с ограниченной ответственностью Компьютерные системы биоуправления ( ООО КОМСИБ)

2025-06-20

9018

ТС N RU Д-RU.АГ78.В.11879

Аппарат биоритмостимуляции программируемым световым и звуковым воздействием

Открытое акционерное общество Научно-производственное предприятие Полёт

2018-05-20

9018

ТС N RU Д-IT.АЛ16.В.42895

Оборудование ветеринарное: электрокоагулятор, рабочая станция для эвтаназии животных

2006-11-20

9018

ТС N RU Д-KR.АВ45.В.31368

Оборудование исключительно для косметологических салонов: аппараты для ультразвукового лифтинга

EINS MED CO., LTD, Republic Korea

2029-10-20

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.07181

Аппарат КВЧ-ИК терапии со сменными излучателями (№1, №2, №3, №4, №5) «СПИНОР®» в следующих исполнениях:» СПИНОР®», «СПИНОР®» исполнение БФ, «СПИНОР®» исполнение ЭЙР

Общество с ограниченной ответственностью СПИНОР ООО Спинор

2012-10-20

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.07182

Аппарат КВЧ терапии с индивидуальным подбором излучающей частоты для воздействия на БАТ «СТЕЛЛА-2», варианты исполнения: аппарат «СТЕЛЛА-2», аппарат «СТЕЛЛА-2» исполнение 01

Общество с ограниченной ответственностью СПИНОР ООО Спинор

2012-10-20

9018

ЕАЭС N RU Д-RU.АЛ16.В.72819

Аппарат фототерапии новорожденных

Общество с ограниченной ответственностью Научно-Производственная Компания КУРС

2025-04-20

9018

ЕАЭС N RU Д-RU.АЛ16.В.75515

Аппарат для дарсонвализации портативный Аппарат для дарсонвализации портативный “Спарк-СТ-117” с принадлежностями: электрод медицинский грибовидный, электрод медицинский гребешковый, электрод медицинский ушной, электрод м

ООО Евромедсервис

2023-05-20

9018

ТС N RU Д-RU.АУ04.В.31365

Кипятильник дезинфекционный электрический автоматический однорежимный модель КДЭА1-4,

Акционерное общество Досчатинский завод медицинского оборудования

2010-12-20

9018

ТС N RU Д-SK.АУ04.В.42159

Аспиратор медицинский,

2019-04-20

9018

ТС N RU Д-RU.АУ04.В.38040

Кровать медицинская функциональная, моделей: КФВ-3-ДЗМО-2Э, КФВ-3-ДЗМО-3Э

Акционерное общество Досчатинский завод медицинского оборудования

2014-03-20

9018

ТС N RU Д-US.АУ37.В.25092

Оборудование электротехническое не медицинского назначения:

2006-04-20

9018

ЕАЭС N RU Д-CN.АЛ16.В.73333

Анализатор биохимический автоматический, модель LW C200i, с принадлежностями: — устройство для перемешивания — шприцевой дозатор для образцов — электромагнитный клапан — первичный фильтр — вторичный фильтр — насос жидкостн

Shenzhen Landwind Industry Co., Ltd.

2002-05-20

9018

ТС N RU Д-IT.АЛ16.В.59372

Оборудование ветеринарное, напряжение питания 220 Вольт: камеры изоляционные, приборы для измерения давления у грызунов, электрокардиограф, система переливания крови, приборы для анестезии,

2021-11-20

9018

ТС N RU Д-RU.АЛ16.В.59394

Консоли газораспределительные КГР, модели: КГР-1ХХ, КГР-2ХХ, КГР-35Х, КГР-45Х с принадлежностями:

Закрытое акционерное общество АТРИУМ

2021-11-20

9018

ТС N RU Д-RU.АЯ79.В.05914

АППАРАТ электрохирургический высокочастотный ЭХВЧ-350-4 в комплектации: 1. Источник тока высокой частоты — 1шт., 2. Педаль (педальный выключатель) — 1шт., 3. Электрод нейтральный — 1шт., 4. Электрод нейтральный для работы

Закрытое акционерное общество Сибирский научно-исследовательский и испытательный центр медицинской техники, дочернее общество открытого акционерного общества НПО Экран (ЗАО СибНИИЦМТ)

2022-12-20

9018

Парацетамол | Биохимик

Ненаркотический анальгетик, блокирует циклооксигеназу 1 и циклооксигеназу 2 преимущественно в центральной нервной системе, воздействуя на центры боли и терморегуляции. В воспаленных тканях клеточные пероксидазы нейтрализуют влияние парацетамола на циклооксигеназу, что объясняет практически полное отсутствие противовоспалительного эффекта. Отсутствие блокирующего влияния на синтез простогландина в периферических тканях обусловливает отсутствие у него отрицательного влияния на водно-солевой обмен (задержка ионов натрия и воды) и слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта.

Фармакокинетика

Абсорбция — высокая, время достижения максимальной концентрации препарата в плазме – 0,5-2 ч; максимальная концентрация препарата в плазме (Cmax) — 5-20 мкг/мл. Связь с белками плазмы – 15%. Проникает через гематоэнцефалический барьер. Менее 1 % от принятой кормящей матерью дозы парацетамола проникает в грудное молоко.

Метаболизируется в печени по трем основным путям: конъюгация с глюкуронидами, конъюгация с сульфатами, окисление микросомальными ферментами печени. В последнем случае образуются токсичные промежуточные метаболиты, которые впоследствии конъюгируют с глутатионом, а затем с цистеином и меркаптуровой кислотой. Основными изоферментами цитохрома Р450 для данного пути метаболизма являются изофермент CYP2E1 (преимущественно), CYP1A2 и CYP3A4 (второстепенная роль). При дефиците глутатиона эти метаболиты могут вызывать повреждение и некроз гепатоцитов.

Дополнительными путями метаболизма являются гидроксилирование до 3-гидрокси-парацетамола и метоксилирование до 3-метоксипарацетамола, которые впоследствии конъюгируют с глюкуронидами или сульфатами.

У взрослых преобладает глюкуронирование, у новорожденных (в т.ч. недоношенных) и маленьких детей — сульфатирование. Конъюгированные метаболиты парацетамола (глюкурониды, сульфаты и конъюгаты с глутатионом) обладают низкой фармакологической (в том числе токсической) активностью.

Период полувыведения препарата (T½) – 1 — 4 ч. Выводится почками в виде метаболитов, преимущественно конъюгатов, только 3% в неизмененном виде. У пожилых пациентов снижается клиренс препарата и увеличивается T½.

8 ужасающих инструментов Старые врачи использовали для вашего хлама

Продолжить чтение ниже

«Брюшной мозг». Теперь есть фраза, которая никогда не должна была выходить из моды.

Хорошо, обещаем, больше никаких ужасающих инструментов в этом списке.

3 Ротор Recto

Подождите, еще один. И это называется проклятый RECTO ROTOR. Да, такое имя заслуживает заглавными буквами.

При высоте шести дюймов было заявлено, что RECTO ROTOR «достигнет вашего жизненно важного места с такой хорошей целью», что намекает на то, что существуют другие продукты, которые достигают «жизненно важной точки» с одним лишь недоброжелательством. его сердце и планы мирового господства спрятаны под его мышкой.

Продолжить чтение ниже


А теперь представьте, что у вас припадок в заднице.

После прикосновения к жизненно важному месту простое нажатие переключателя привело бы адскую машину в адский конвульсивный припадок, поскольку она вибрировала все глубже в вашу задницу, как разведчик нефти, бурящий нефть. Но вот в чем дело: Recto Rotor знает, что в твоей заднице нет ничего грубого. Это умнее, чем это. Так что он делает? Поставляет собственную нефть. При повороте шкалы вентиляционные отверстия наверху ротора покрывают всю простату белым лосьоном… э … ну … извините, мы просто не можем придумать визуальное сравнение для этого.

В объявлении говорится: «Достаточно большой, чтобы быть эффективным. Достаточно маленький для всех, кто старше 15 лет». Пожалуйста, Господь, скажи нам, что это всего лишь оценка на глаз, а не результат всестороннего тестирования продукта.

Продолжить чтение ниже


«Итак, сегодня мы узнали, что 14 лет — это слишком мало, это хорошо знать.

Честно говоря, мы начинаем думать, что быть изобретателем на рубеже веков означало, что у человека были скрытые гомосексуальные желания, которые проявлялись в форме совершенно бесполезных штуковин, связанных с задницей.Мы представляем множество подавленных парней, похожих на Док Брауна, стоящих над нашими обнаженными ягодицами, с двумя электродами в форме фаллоса, соединенными потрескивающим синим током электричества.

1 отчет о лечении пролапса прямой кишки III степени продольной частичной резекцией слизистой оболочки прямой кишки анального канала, Фиксация нижнего сустава прямой кишки и сокращение анального канала

Austin J Surg. 2019; 6 (17): 1207.

¹Проктологическое отделение 2-й филиальной больницы г. Аньхойский университет китайской медицины, Китай

* Автор, ответственный за переписку: Yong Hou, Proctology Отделение второй дочерней больницы Аньхой Университет китайской медицины, Хэфэй, Китай

Аннотация

Подарите в декабре 2018 г., проктологическое отделение 2-го филиала. больница аньхойского университета китайской медицины пролечила III степень ректального пациентам с пролапсом путем резекции продольной части сустава слизистой оболочки прямой кишки анального канала для лечение анального сокращения.Через 20 дней полное восстановление разреза: анального функция восстановлена, после выздоровления пациент выписан из стационара; Следовать за Через 1 месяц после выписки у больной анальная функция хорошая, дефекация регулярная. функция, и отсутствие рецидива выпадения слизистой оболочки прямой кишки и дефекации недержание мочи и другие осложнения.

Ключевые слова: Выпадение прямой кишки; Трансанальная резекция слизистой оболочки прямой кишки; Анальный перетяжка; Лечебный эффект

Введение

Выпадение прямой кишки, также известное как выпадение прямой кишки, включает выпадение слизистой оболочки и пролапс прямой кишки на всю толщину [1].В соответствии с патологическое строение, смещение вниз и выпадение слизистой оболочки прямой кишки за пределами заднего прохода называется пролапсом слизистой оболочки прямой кишки, а полнослойное выпадение прямой кишки относится к нисходящему смещение и выпадение анального канала, прямой кишки и даже части сигмовидной кишки вне заднего прохода [2]. Степень пролапса согласно выпадать в I (легкую), II (среднюю), III (тяжелую) степень, ее III степень при выпадении прямой кишки ротора может достигать 8-10 см. выше, очень легко снова появиться после сброса или сброса относительно сложно, требуется операция [3].В настоящее время при лечении ректального Способы хирургии пролапса многочисленны, имеют разные преимущества и недостатки и клинический лечебный эффект и операция, для боль небольшая, лечебный эффект высокий, низкая стоимость идеального лечения, режиссер нашей больницы Ма Чунгэн в сочетании с возрастом пациента, болезнью, базовые экономические условия и богатый клинический опыт будут продольная частичная резекция слизистой оболочки прямой кишки заднего прохода, дно прямой кишки фиксация, анальный сужающийся сустав, используемый у пациента с тяжелым ректальным пролапс, лечебный эффект удовлетворительный.

Информация о деле

Пациент Хао Моу, мужчина, 18 лет, «повторная анальная масса». пролапс более 10 лет, обострение в течение 2 лет ». Главный Жалоба поступила в больницу 10 декабря 2018 г. при дефекации у пациента было коническое образование красного цвета длиной около 1 см. без явных побуждений 10 лет назад. Это было мягко, и могло быть всасывается сама собой после мочеиспускания. В стуле крови не было, не было явной боли и другого дискомфорта, и не было достаточного внимания. заплатил ему.4 года назад увеличилась частота выпадения анальной массы, и нужно было положиться на руку, чтобы вернуться к внешнему сила, и длина пролапса постепенно увеличивалась. За последние 2 года пациент мог выпадать при сидении на корточках, кашле и стоянии длительное время, а длина пролапса до 8 см, сопровождалась анальным растяжением. Пациенту был назначен пероральный прием и много раз фумигация в других больницах, но нет очевидных лечебных эффект получен. Теперь для диагностики и лечения, затем пришли в нашу больницу для лечения.

Приемный осмотр: пациент средних размеров; Специалист осмотр (положение на корточках): анус находится посередине, а слой прямой кишки выпадал, цилиндрический и розовый, диаметром 6 см. и 9 см в длину. Явных изъязвлений прямой кишки не было. слизистая оболочка, а анальный сфинктер был значительно расслаблен (рис. 1). Не было обнаружено явных отклонений от нормы крови, стула и др. режим мочеиспускания, режим коагуляции, электрокардиограмма и другие вспомогательные обследования.

журналов открытого доступа | ОМИКС Интернэшнл

  • Дом
  • О нас
  • Открытый доступ
  • Журналы
    • Поиск по теме
        • Acta Rheumatologica Журнал открытого доступа
        • Достижения в профилактике рака Журнал открытого доступа
        • Американский журнал этномедицины
        • Американский журнал фитомедицины и клинической терапии
        • Обезболивание и реанимация: текущие исследования Гибридный журнал открытого доступа
        • Анатомия и физиология: текущие исследования Журнал открытого доступа
        • Андрология и гинекология: текущие исследования Гибридный журнал открытого доступа
        • Андрология — открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Анестезиологические коммуникации
        • Ангиология: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Летопись инфекций и антибиотиков Журнал открытого доступа
        • Архивы исследований рака Журнал открытого доступа
        • Архивы медицины Журнал открытого доступа
        • Archivos de Medicina Журнал открытого доступа
        • Рак груди: текущие исследования Журнал открытого доступа
        • Британский биомедицинский бюллетень Журнал открытого доступа
        • Отчет о слушаниях в Канаде Журнал открытого доступа
        • Химиотерапия: открытый доступ Официальный журнал Итало-латиноамериканского общества этномедицины
        • Хроническая обструктивная болезнь легких: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Отчеты о клинических и медицинских случаях
        • Журнал клинической гастроэнтерологии Журнал открытого доступа
        • Клиническая детская дерматология Журнал открытого доступа
        • Колоректальный рак: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Косметология и хирургия лица Журнал открытого доступа
        • Акушерство и гинекология интенсивной терапии Журнал открытого доступа
        • Текущие исследования: интегративная медицина Журнал открытого доступа
        • Стоматологическое здоровье: текущие исследования Гибридный журнал открытого доступа
        • Стоматология Журнал открытого доступа, Официальный журнал Александрийской ассоциации оральной имплантологии, Лондонская школа лицевой ортотропии
        • Дерматология и дерматологические заболевания Журнал открытого доступа
        • Отчеты о случаях дерматологии Журнал открытого доступа
        • Диагностическая патология: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Неотложная медицина: открытый доступ Официальный журнал Всемирной федерации обществ педиатрической интенсивной и интенсивной терапии
        • Эндокринология и диабетические исследования Гибридный журнал открытого доступа
        • Эндокринология и метаболический синдром Официальный журнал Ассоциации осведомленности о СПКЯ
        • Эндокринологические исследования и метаболизм
        • Эпидемиология: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Доказательная медицина и практика Журнал открытого доступа
        • Семейная медицина и медицинские исследования Журнал открытого доступа
        • Лечебное дело: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Гинекология и акушерство Журнал открытого доступа, Официальный журнал Ассоциации осведомленности о СПКЯ
        • Отчет о гинекологии и акушерстве Журнал открытого доступа
        • Лечение волос и трансплантация Журнал открытого доступа
        • Исследования рака головы и шеи Журнал открытого доступа
        • Гепатология и панкреатология
        • Фитотерапия: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Анализ артериального давления Журнал открытого доступа
        • Информация о заболеваниях грудной клетки Журнал открытого доступа
        • Информация о гинекологической онкологии Журнал открытого доступа
        • Внутренняя медицина: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Международный журнал болезней органов пищеварения Журнал открытого доступа
        • Международный журнал микроскопии
        • Международный журнал физической медицины и реабилитации Журнал открытого доступа
        • JOP.Журнал поджелудочной железы Журнал открытого доступа
        • Журнал аденокарциномы Журнал открытого доступа
        • Журнал эстетической и реконструктивной хирургии Журнал открытого доступа
        • Журнал артрита Журнал открытого доступа
        • Журнал спортивного совершенствования Гибридный журнал открытого доступа
        • Журнал автакоидов и гормонов
        • Журнал крови и лимфы Журнал открытого доступа
        • Журнал болезней крови и переливания Журнал открытого доступа, Официальный журнал Международной федерации талассемии
        • Журнал исследований крови и гематологических заболеваний Журнал открытого доступа
        • Журнал отчетов и рекомендаций по костям Журнал открытого доступа
        • Журнал костных исследований Журнал открытого доступа
        • Журнал исследований мозга
        • Журнал клинических испытаний рака Журнал открытого доступа
        • Журнал диагностики рака Журнал открытого доступа
        • Журнал исследований рака и иммуноонкологии Журнал открытого доступа
        • Журнал онкологической науки и исследований Журнал открытого доступа
        • Журнал канцерогенеза и мутагенеза Журнал открытого доступа
        • Журнал кардиологической и легочной реабилитации
        • Журнал клеточной науки и апоптоза
        • Журнал детства и нарушений развития Журнал открытого доступа
        • Журнал детского ожирения Журнал открытого доступа
        • Журнал клинических и медицинских исследований
        • Журнал клинической и молекулярной эндокринологии Журнал открытого доступа
        • Журнал клинической анестезиологии: открытый доступ
        • Журнал клинической иммунологии и аллергии Журнал открытого доступа
        • Журнал клинической микробиологии и противомикробных препаратов
        • Журнал клинических респираторных заболеваний и ухода Журнал открытого доступа
        • Журнал коммуникативных расстройств, глухих исследований и слуховых аппаратов Журнал открытого доступа
        • Журнал врожденных заболеваний
        • Журнал контрацептивных исследований Журнал открытого доступа
        • Журнал стоматологической патологии и медицины
        • Журнал диабета и метаболизма Официальный журнал Европейской ассоциации тематической сети по биотехнологиям
        • Журнал диабетических осложнений и медицины Журнал открытого доступа
        • Журнал экологии и токсикологии Журнал открытого доступа
        • Журнал судебной медицины Журнал открытого доступа
        • Журнал желудочно-кишечной и пищеварительной системы Журнал открытого доступа
        • Журнал рака желудочно-кишечного тракта и стромальных опухолей Журнал открытого доступа
        • Журнал генитальной системы и заболеваний Гибридный журнал открытого доступа
        • Журнал геронтологии и гериатрических исследований Журнал открытого доступа
        • Журнал токсичности и болезней тяжелых металлов Журнал открытого доступа
        • Журнал гематологии и тромбоэмболических заболеваний Журнал открытого доступа
        • Журнал гепатита Журнал открытого доступа
        • Журнал гепатологии и желудочно-кишечных расстройств Журнал открытого доступа
        • Журнал ВПЧ и рака шейки матки Журнал открытого доступа
        • Журнал гипертонии: открытый доступ Журнал открытого доступа, Официальный журнал Словацкой лиги по борьбе с гипертонией
        • Журнал визуализации и интервенционной радиологии Журнал открытого доступа
        • Журнал интегративной онкологии Журнал открытого доступа
        • Журнал почек Журнал открытого доступа
        • Журнал лейкемии Журнал открытого доступа
        • Журнал печени Журнал открытого доступа
        • Журнал печени: болезни и трансплантация Гибридный журнал открытого доступа
        • Журнал медицинской и хирургической патологии Журнал открытого доступа
        • Журнал медицинских диагностических методов Журнал открытого доступа
        • Журнал медицинских имплантатов и хирургии Журнал открытого доступа
        • Журнал медицинской физики и прикладных наук Журнал открытого доступа
        • Журнал медицинской физиологии и терапии
        • Журнал медицинских исследований и санитарного просвещения
        • Журнал медицинской токсикологии и клинической судебной медицины Журнал открытого доступа
        • Журнал метаболического синдрома Журнал открытого доступа
        • Журнал микробиологии и патологии
        • Журнал молекулярной гистологии и медицинской физиологии Журнал открытого доступа
        • Журнал молекулярной патологии и биохимии
        • Журнал морфологии и анатомии
        • Журнал молекулярно-патологической эпидемиологии MPE Журнал открытого доступа
        • Журнал неонатальной биологии Журнал открытого доступа
        • Журнал новообразований Журнал открытого доступа
        • Журнал нефрологии и почечных заболеваний Журнал открытого доступа
        • Журнал нефрологии и терапии Журнал открытого доступа
        • Журнал исследований нейроэндокринологии
        • Журнал новых физиотерапевтов Журнал открытого доступа
        • Журнал расстройств питания и терапии Журнал открытого доступа
        • Журнал ожирения и расстройств пищевого поведения Журнал открытого доступа
        • Журнал ожирения и терапии Журнал открытого доступа
        • Журнал терапии ожирения и похудания Журнал открытого доступа
        • Журнал ожирения и метаболизма
        • Журнал одонтологии
        • Журнал онкологической медицины и практики Журнал открытого доступа
        • Журнал онкологических исследований и лечения Журнал открытого доступа
        • Журнал трансляционных исследований онкологии Журнал открытого доступа
        • Журнал гигиены полости рта и здоровья Журнал открытого доступа, Официальный журнал Александрийской ассоциации оральной имплантологии, Лондонская школа лицевой ортотропии
        • Журнал ортодонтии и эндодонтии Журнал открытого доступа
        • Журнал ортопедической онкологии Журнал открытого доступа
        • Журнал остеоартрита Журнал открытого доступа
        • Журнал остеопороза и физической активности Журнал открытого доступа
        • Журнал отологии и ринологии Гибридный журнал открытого доступа
        • Журнал детской медицины и хирургии
        • Журнал по лечению боли и медицине Журнал открытого доступа
        • Журнал паллиативной помощи и медицины Журнал открытого доступа
        • Журнал периоперационной медицины
        • Журнал физиотерапии и физической реабилитации Журнал открытого доступа
        • Журнал исследований и лечения гипофиза
        • Журнал беременности и здоровья ребенка Журнал открытого доступа
        • Журнал профилактической медицины Журнал открытого доступа
        • Журнал рака простаты Журнал открытого доступа
        • Журнал легочной медицины Журнал открытого доступа
        • Журнал пульмонологии и респираторных заболеваний
        • Журнал редких заболеваний: диагностика и терапия
        • Журнал регенеративной медицины Гибридный журнал открытого доступа
        • Журнал репродуктивной биомедицины
        • Журнал сексуальной и репродуктивной медицины подписка
        • Журнал спортивной медицины и допинговых исследований Журнал открытого доступа
        • Журнал стероидов и гормонологии Журнал открытого доступа
        • Журнал хирургии и неотложной медицины Журнал открытого доступа
        • Журнал хирургии Jurnalul de Chirurgie Журнал открытого доступа
        • Журнал тромбоза и кровообращения: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Журнал заболеваний щитовидной железы и терапии Журнал открытого доступа
        • Журнал традиционной медицины и клинической натуропатии Журнал открытого доступа
        • Журнал травм и лечения Журнал открытого доступа
        • Журнал исследований опухолей Журнал открытого доступа
        • Журнал исследований и отчетов по опухолям Журнал открытого доступа
        • Журнал сосудистой и эндоваскулярной терапии Журнал открытого доступа
        • Журнал сосудистой медицины и хирургии Журнал открытого доступа
        • Журнал женского здоровья, проблем и ухода Гибридный журнал открытого доступа
        • Журнал йоги и физиотерапии Журнал открытого доступа, Официальный журнал Федерации йоги России и Гонконгской ассоциации йоги
        • La Prensa Medica
        • Контроль и ликвидация малярии Журнал открытого доступа
        • Материнское и детское питание Журнал открытого доступа
        • Медицинские и клинические обзоры Журнал открытого доступа
        • Медицинская и хирургическая урология Журнал открытого доступа
        • Отчеты о медицинских случаях Журнал открытого доступа
        • Медицинские отчеты и примеры из практики в открытом доступе
        • Нейроонкология: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Медицина труда и здоровье Журнал открытого доступа
        • Радиологический журнал OMICS Журнал открытого доступа
        • Отчеты о онкологии и раковых заболеваниях Журнал открытого доступа
        • Здоровье полости рта и лечение зубов Журнал открытого доступа Официальный журнал Лондонской школы лицевой ортотропии
        • Отчеты о заболеваниях полости рта Журнал открытого доступа
        • Ортопедическая и мышечная система: текущие исследования Журнал открытого доступа
        • Отоларингология: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Заболевания поджелудочной железы и терапия Журнал открытого доступа
        • Педиатрическая помощь Журнал открытого доступа
        • Скорая педиатрическая помощь и медицина: открытый доступ Журнал открытого доступа
        • Педиатрия и медицинские исследования
        • Педиатрия и терапия Журнал открытого доступа
        • Пародонтология и протезирование Журнал открытого доступа
        • Психология и психиатрия: открытый доступ
        • Реконструктивная хирургия и анапластология Журнал открытого доступа
        • Отчеты о раке и лечении
        • Отчеты в маркерах заболеваний
        • Отчеты в исследованиях щитовидной железы
        • Репродуктивная система и сексуальные расстройства: текущие исследования Журнал открытого доступа
        • Исследования и обзоры: Journal of Dental Sciences Журнал открытого доступа
        • Исследования и обзоры: медицинская и клиническая онкология
        • Исследования и отчеты в гастроэнтерологии Журнал открытого доступа
        • seo sorgula Журнал открытого доступа
        • Кожные заболевания и уход за кожей Журнал открытого доступа
        • Хирургия: Текущие исследования Официальный журнал Европейского общества эстетической хирургии
        • Трансляционная медицина Журнал открытого доступа
        • Травмы и неотложная помощь Журнал открытого доступа
        • Тропическая медицина и хирургия Журнал открытого доступа
        • Универсальная хирургия Журнал открытого доступа
        • Всемирный журнал фармакологии и токсикологии

Границы | Новый терапевтический подход к стволовым клеткам колоректального рака: блокирование сигнальной оси PI3K / Akt с помощью кофейной кислоты

Введение

Заболеваемость и смертность от колоректального рака остаются довольно высокими в западном мире и США (Siegel et al., 2013). Для лечения колоректального рака были разработаны различные терапевтические подходы, но общий уровень смертности остается чрезвычайно высоким и неизменным (Haggar and Boushey, 2009). Фактически, примерно у 50% пациентов после полной хирургической резекции произойдет рецидив и в конечном итоге они умрут от резистентного к химиотерапии метастатического заболевания (Gramont, 2005; Marshall et al., 2007; Kopetz et al., 2008; De Dosso et al., 2009). . Хотя причина рецидива еще полностью не выяснена, присутствие небольшого подмножества самообновляющихся раковых стволовых клеток (CSC) в опухоли считается одним из основных факторов, способствующих метастазированию и рецидиву опухоли (Ayob and Ramasamy , 2018; Ян и др., 2020). РСК действительно были идентифицированы почти при всех основных типах рака, включая рак груди (Al-Hajj et al., 2003), рак толстой кишки (Ricci-Vitiani et al., 2007) и лейкоз (Jamieson, 2008). Важно отметить, что ОСК устойчивы к традиционным противораковым методам лечения, таким как химиотерапия (Makena et al., 2020) и лучевая терапия (Schulz et al., 2019). Следовательно, выборочное нацеливание и устранение CSC в конечном итоге улучшит результаты для пациентов, проходящих лечение колоректального рака. Однако недостатком является то, что имеющиеся в настоящее время знания о колоректальных РСК во многом зависят от биологических свойств нормальных стволовых клеток.Таким образом, нацеливание на эти общие биологические характеристики для устранения колоректальных РСК может уменьшить количество нормальных стволовых клеток и впоследствии предотвратить нормальную регенерацию кишечника. В этом контексте особое внимание в последнее время было уделено избирательному нацеливанию на колоректальные РСК без воздействия на нормальные стволовые или не стволовые клетки.

Многие исследователи пытались эффективно устранить колоректальные РСК с помощью различных синтетических агентов, таких как миметик гликозаминогликана (Boothello et al., 2019), наночастицы SN-38 (Alibolandi et al., 2018), аналог куркумина (Su et al., 2018), ингибитор контрольной точки киназы 1 (Chk1) (Manic et al., 2018). Хотя они достигли умеренного успеха, общие результаты были неудовлетворительными из-за низкой химиочувствительности колоректальных РСК. Таким образом, есть надежда, что новое биологически активное соединение на основе натуральных продуктов с минимальной токсичностью может значительно улучшить чувствительность и эффективность воздействия на колоректальные РСК. Особое внимание в последнее время было уделено потенциальному ингибирующему действию кофеиновой кислоты, основного биологически активного компонента кофе, на несколько типов рака, включая рак груди (Kabala-Dzik et al., 2018), рака кожи (Zeng et al., 2018) и печени (Espindola et al., 2019). Однако специфические ингибирующие эффекты кофейной кислоты против колоректальных РСК и лежащие в их основе молекулярные механизмы остаются малоизученными, несмотря на то, что кофе доступен по цене и давно используется человеком.

В текущем исследовании мы впервые продемонстрировали, что кофейная кислота значительно ингибирует несколько колоректальных CSC-ассоциированных характеристик, таких как потенциал роста, миграционная способность, радиоустойчивость, плюрипотентность и канцерогенность in vitro, и in vivo. Более поразительно, мы также демонстрируем, что кофейная кислота проявляет противораковую активность, ингибируя каскад PI3K / Akt in vitro и in vivo . Заметно усиленная сигнальная активность PI3K / Akt была недавно обнаружена при нескольких типах рака человека (Hoxhaj and Manning, 2020; Jiang et al., 2020), особенно при раке желудочно-кишечного тракта (GI) (Matsuoka and Yashiro, 2014; Malley and Pidgeon). , 2016; Corti et al., 2019). Несмотря на многие убедительные находки, многие вопросы, касающиеся функциональной взаимосвязи между сигнальной активностью PI3K / Akt и многими свойствами колоректальных CSC, такими как радиационная устойчивость, метастазирование и туморогенез, остаются без ответа.Важно отметить, что здесь мы также продемонстрировали, что передача сигналов PI3K / Akt, как предполагаемый маркер колоректальных РСК, регулирует рост кишечной опухоли путем облегчения экспрессии факторов, связанных с плюрипотентностью, миграционной способности и устойчивости к радиации in vitro и in vitro. естественным образом. Взятые вместе, эти результаты предполагают, что ингибирование сигнального каскада PI3K / Akt с помощью кофейной кислоты может быть эффективной терапевтической стратегией, которая избирательно воздействует на колоректальные CSCs.

Материалы и методы

Культура клеток и реагенты

Клеточная линия аденокарциномы толстой кишки человека HCT116 была приобретена в Korean Cell Line Bank (KCLB, Сеул, Республика Корея) и культивирована в среде Gibco ® RPMI 1640 (Invitrogen, Grand Island, NY) с добавлением 100 Ед / мл. пенициллин / стрептомицин (Lonza, Базель, Швейцария) и ультрацентрифугировали 10% фетальную бычью сыворотку (FBS) при 37 ° C в увлажненном инкубаторе с 5% CO 2 . Активатор Akt SC79 (Кат.№: SML0749) и кофейную кислоту (№ по каталогу: C0625) были приобретены у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури). Ингибитор Akt V (Кат. №: 124012) был приобретен у CalBiochem (Ла-Холья, Калифорния).

Анализ пролиферации клеток

Анализ МТТ использовали для определения цитотоксичности кофейной кислоты в соответствии с протоколом производителя. Клетки HCT116 (2 × 10 4 клеток / лунку) высевали в 96-луночные планшеты. После 24 часов инкубации клетки обрабатывали возрастающей концентрацией кофейной кислоты в течение 48 часов.Жизнеспособные клетки измеряли при длине волны 570 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов VersaMax.

Анализ образования сфер CSC

Клеточная линия HCT116 широко использовалась в качестве модели in vitro колоректальных РСК в различных предыдущих исследованиях (Xiang et al., 2006; Chen et al., 2018; Quarni et al., 2019). Поэтому клетки HCT116 культивировали в бессывороточной среде (Invitrogen Life Technologies, Калифорния, США), содержащей 20 нг / мл основного фактора роста фибробластов (bFGF, PeproTech Inc., Rocky Hill, NJ, United States), B27), добавка B27 за вычетом витамина A (Gibco, Life Technologies, 1 ×), 20 нг / мл эпидермального фактора роста (EGF, PeproTech Inc., Rocky Hill, NJ, США) и 4 мкг / мл гепарина (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури), а затем высевали (1 × 10 4 клеток / лунку) на многолуночные планшеты со сверхнизким прикреплением (ULA) Corning Costar. Через 10 дней сформированные сферы CSC из каждой реплицируемой лунки диаметром ≥ 100 мкм подсчитывали под инвертированным микроскопом при увеличении в 50 раз.Процент раковых клеток со способностью формировать сферы CSC, называемой «эффективностью образования опухолевых сфер (TSFE)», был проанализирован следующим образом: [(количество сфер CSC, которые были сформированы / количество одиночных клеток, которые были помещены в многолуночные планшеты) × 100].

Выделение белка и вестерн-блоттинг

Уровни экспрессии белка анализировали с помощью вестерн-блоттинга, как описано в наших предыдущих исследованиях (Park et al., 2020). Клетки лизировали в буфере, содержащем 50 мМ Трис, 5 мМ EDTA, 150 мМ NaCl, 1 мМ DTT, 0.01% NP 40 и 0,2 мМ PMSF. Концентрации белка в общих клеточных лизатах измеряли с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта. Образцы, содержащие равные количества белка, разделяли электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и затем переносили на мембраны из поливинилидендифторида (PVDF) (Bio-Rad Laboratories). Мембраны блокировали 5% обезжиренным молоком в трис-буферном физиологическом растворе, содержащем Твин-20, при комнатной температуре. Затем мембраны инкубировали с первичными антителами против ММР-2 (Cell signaling # 4022), MMP-9 (Cell Signaling # 13667), фосфо-PI3K (Cell Signaling # 4228), общего PI3K (Cell Signaling # 4292), фосфора. -Akt (Cell Signaling # 4060), общий Akt (Cell Signaling # 4491) и β-актин (Abcam, MA, США, ab189073) в течение ночи при 4 ° C, а затем с поликлональными HRP-конъюгированными козьими антимышиными IgG (BD Pharmingen, 554002) или вторичных антител козьего антикроличьего IgG (BD Pharmingen, Сан-Диего, Калифорния, США, 554021) при комнатной температуре в течение 60 мин.Комплексы антиген-антитело детектировали с использованием реагентов для вестерн-блоттинга ECL (GE Healthcare, Bucks, United Kingdom).

Анализ ПЦР в реальном времени

Суммарную РНК

экстрагировали из однослойных культивируемых клеток или сфер CSC с использованием коммерческого реагента TRIzol ® (Invitrogen Life Technologies, CA, США) в соответствии с инструкциями производителя. Чистоту РНК оценивали путем измерения отношения оптической плотности при 260 и 280 нм. КДНК первой цепи синтезировали с использованием обратной транскриптазы SuperScript II (Invitrogen Life Technologies, Калифорния, США) с 1 мкг общей РНК.КДНК первой цепи синтезировали с использованием Express SYBR-Green qPCR Supermix (BioPrince, Сеул, Южная Корея). qPCR выполняли с использованием циклера для ПЦР в реальном времени QIAGEN, Rotor-Gene Q. Относительные уровни экспрессии мРНК генов-мишеней рассчитывали как кратные изменения с использованием метода ΔΔCT. Последовательности праймеров ПЦР перечислены в таблице 1.

Таблица 1. Последовательности праймеров для количественной ОТ-ПЦР.

Проточная цитометрия

Анализ

FACS и сортировку клеток выполняли с использованием машин FACS Calibur и FACS Aria (Becton Dickinson, Palo Alto, CA) соответственно.Данные FACS анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Ashland, OR). Использовали антитела к следующим белкам: PE-конъюгированный CD44 (BD Bioscience, Cat. 559942, разведение 1/40) и 133 (MACS; Miltenyi Biotech, Sunnyvale, CA, 130-080-081, разведение 1/40). Набор MACS MultiSort Kit (Miltenyi Biotech, 130-090-757) использовался для сортировки клеток CD44 , CD133 и CD44 + , CD133 + в соответствии с протоколом производителя. Ворота FACS устанавливали путем окрашивания изотипическим антителом или вторичным антителом.

Иммунофлуоресцентное окрашивание

Клетки карциномы толстой кишки и опухолевые ткани человека фиксировали 4% раствором параформальдегида (PFA) в течение 10 мин при комнатной температуре. Клетки HCT116 были проницаемы с 0,4 M глицином и 0,3% Triton X-100, а неспецифическое связывание блокировалось 2% нормальной свиной сывороткой (DAKO, Glostrup, Дания), как описано в наших предыдущих исследованиях (Park et al., 2020). После фиксации формалином срезы опухоли, залитые парафином (4 мкм), депарафинизировали в ксилоле и регидратировали в градиенте спирта, после чего эндогенная пероксидазная активность блокировалась 10% перекисью водорода.Срезы опухоли погружали в Трис-ЭДТА (pH 9,0) (Thermo Fisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания, США), промывали в трис-буферном физиологическом растворе и нагревали в микроволновой печи. Образцы инкубировали со следующими первичными антителами: антителом против фосфо-Akt (Cell Signaling # 4060), CD44 (Abcam, ab46793) и CD133 (Biorbyt, Кембридж, Великобритания, Orb114000, 43280). Затем срезы обрабатывали вторичным антителом и инкубировали с комплексом авидин-биотин-пероксидаза (набор MOM) (Vector Laboratories, Burlingame, CA, США).Образцы исследовали с помощью флуоресцентной микроскопии (Zeiss LSM 510 Meta).

Эксперимент по опухолеобразованию

Все эксперименты на животных были одобрены и проводились в соответствии с Комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) (LCDI-2013-0031) Института рака и диабета Ли Гил Я при Университете Гачон. Чтобы оценить эффективность кофеиновой кислоты, мы использовали модели ксенотрансплантатов на животных. Клетки HCT116 (3 × 10 6 клеток / мышь) инъецировали в левый бок мышей NSG.После инокуляции опухоли объем опухоли достиг приблизительно 100 мм 3 , и мышей случайным образом делили на контрольную (носитель) и группы, получавшие кофеиную кислоту (10 мг / кг, внутрибрюшинно, ежедневно). Размер опухоли измеряли дважды в неделю и рассчитывали объем опухоли по следующей формуле: объем = (продольный × поперечный 2 ) / 2. Кроме того, перед аутопсией был рассчитан трехмерный объем опухоли с использованием объемного сканера микро-КТ (NFR-Polaris G90, NanoFocusRay, Иксан, Южная Корея).

Ксенотрансплантат опухоли, полученный пациентом (PDTX) Модель

Образцы опухолей человека были получены от пациентов с диагнозом колоректальный рак после получения письменного информированного согласия всех пациентов. Все исследования были одобрены Институциональным наблюдательным советом Медицинского колледжа Университета Гачон (GCIRB-2013-66). Свежие опухолевые ткани поддерживали в среде DMEM (Invitrogen) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 1% гидрохлорида цефотиама (Hanmi Pharma, Сеул, Корея), 100 Ед / мл пенициллина и 100 Ед / мл стрептомицина (Lonza).Чтобы установить модели PDTX, свежие образцы опухолей были собраны сразу после операции и промыты средой DMEM, содержащей антибиотики. Ткани опухоли измельчали ​​на мелкие кусочки (3 × 3 × 3 мм) и имплантировали подкожно мышам NSG. Самок мышей NSG в возрасте от шести до восьми недель (NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl / SzJ, Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, США) использовали для имплантации опухолевых тканей. После того, как опухоль вырастала до среднего диаметра 10 мм или достигла объема опухоли 1000 мм 3 , мышей умерщвляли, и опухолевые ткани последовательно переносили дополнительным мышам.

Анализ миграции Transwell

Клеток колоректального рака высевали с плотностью 1 × 10 5 клеток / лунку во вставки для трансвеллеров из поликарбоната BD Falcon (мембраны с размером пор 8 мкм для 24 лунок / планшет) для отслеживания миграционной способности клеток на планшете. Немигрирующие клетки на верхней поверхности поликарбонатных мембран вставок трансвелл были удалены путем очистки тампоном с ватным наконечником, как описано в наших предыдущих исследованиях (Park et al., 2019). Мигрировавшие клетки на нижней поверхности поликарбонатных мембран вставок трансвелл фиксировали 4% параформальдегидом (PFA) в течение 10 мин, а затем окрашивали гематоксилином в течение 20 мин при комнатной температуре.Затем количество мигрирующих клеток анализировали и подсчитывали в трех случайно выбранных полях на поликарбонатную мембрану для каждого состояния под световым микроскопом.

Анализ базы данных Oncomine

Мы использовали базу данных Oncomine Cancer Microarray для анализа активности передачи сигналов Akt между безрецидивными и рецидивирующими пациентами с колоректальным раком или пациентами с неметастатическим и метастатическим колоректальным раком (когортный набор данных Seiber). Значение экспрессии Akt было преобразовано в log2 с последующим срединным центрированием для каждого гена.Все статистические анализы были выполнены с помощью GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, Inc., Ла-Хойя, Калифорния, США).

Обогащенный анализ набора генов (GSEA) различных рецидивных и метастатических колоректальных рака

Были собраны и проанализированы клинические данные пациентов с несколькими типами колоректального рака с использованием набора данных Seiber (GSE14333) (Jorissen et al., 2009) из «R2: Genomics Analysis and Visualization Platform». Первичные данные доступны в GEO под серийным инвентарным номером.GSE143335. GSEA для идентификации путей, обогащенных ранжированными списками генов, отфильтрованными по определенному порогу, выполнялся с использованием Java-реализации GSEA, полученной из http://www.broadinstitute.org/gsea/. Дифференциально экспрессируемые гены (DEG) между неметастатическим и метастатическим или между единовременным и рецидивирующим колоректальным раком анализировали на основании относительного кратного изменения, полученного из набора данных когорты Зайбера (GSE14333). Анализ включал наборы генов из путей MSigDB, C2: все курируемые гены (c2.all.v5.0.symbols.gmt) или c6: наборы генов онкогенных сигнатур (c6.all.v5.0.symbols.gmt). Нормализованная оценка обогащения (NES) учитывает различия в размере набора генов. Значение FDR q (вероятность того, что набор генов с данным NES представляет ложноположительный результат) использовалось для установки порога значимости.

Ingenuity Upstream Regulator Analysis

Анализ «восходящего регулятора» был выполнен с помощью программного обеспечения Ingenuity Pathway Analysis (IPA) версии 2.0 (Ingenuity Systems, Inc., Редвуд-Сити, Калифорния). Профили дифференциальной экспрессии генов ( t -тест, P <0,05) между неметастатическим и метастатическим раком толстой кишки были подвергнуты последующему анализу с вышестоящим регулятором. Статистическая значимость регулятора передачи сигналов-мишеней была проанализирована с помощью точного теста Фишера, который использовали для определения дифференциально экспрессирующихся генов по результатам микроматрицы. Оценка активации (оценка z ) использовалась для прогнозирования статуса активации / ингибирования целевых молекул путем сравнения идентифицированных дифференциально регулируемых генов (либо последовательно повышающих, либо последовательно понижающих регуляцию) в наборе данных.

Статистический анализ

Все экспериментальные данные были представлены как среднее значение ± стандартное отклонение и основаны как минимум на трех различных экспериментах. Статистический анализ экспериментальных групп проводили с использованием GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, Inc., Ла-Хойя, Калифорния, США) после однофакторного дисперсионного анализа. Значение p менее 0,05 можно рассматривать как значимый результат.

Результаты

Кофейная кислота эффективно подавляет способность к самовозобновлению и стеблеобразные свойства колоректальных CSC

in vitro

Чтобы определить, подавляет ли кофейная кислота онкогенность и различные свойства стволовых клеток колоректальных РСК, мы сначала создали систему культуры, формирующую трехмерную сферу, как модель культуры in vitro колоректальных РСК.Предыдущие исследования показали, что характеристики, подобные стволовым клеткам, эффективно обогащаются системой культуры неадгезивных сфер при различных типах рака, включая рак груди (Lee et al., 2019), толстой кишки (Olejniczak et al., 2018), легкого (Zhang et al., 2018) и печени (Ma et al., 2019). Как и ожидалось, уровни экспрессии связанных с плюрипотентностью факторов, таких как KLF4, NANOG и SOX2, были более высоко экспрессированы в сфероидообразующих клетках, чем в адгезивных клетках (Фигуры 1A, B). Предыдущие исследования показали, что CD44 (Du et al., 2008; Guo and Frenette, 2014) и CD133 (Kazama et al., 2018) являются прогностическими маркерами плохой выживаемости и плохой реакции. Следовательно, для дальнейшего анализа клоногенного потенциала в этих предполагаемых клетках с положительным маркером CSC, клетки CD44 , CD133 и CD44 + , CD133 + были отсортированы с помощью двухцветной проточной цитометрии (рис. 1С). Двойно-положительные клетки показали значительно более высокий клоногенный потенциал, чем двойно-отрицательные клетки (рис. 1D). Затем мы дополнительно проанализировали уровни экспрессии множественных связанных с плюрипотентностью генов в этих предполагаемых CSC-маркерных положительных клетках; CD44 CD133 и CD44 + CD133 + клетки были отсортированы с помощью двухцветной проточной цитометрии.Соответственно, уровни экспрессии множественных связанных факторов, связанных с плюрипотентностью, были значительно выше в дважды положительных клетках, чем в дважды отрицательных клетках (рис. 1E). Затем мы проверили эффективность кофеиновой кислоты в подавлении способности к самообновлению и стебельных свойств колоректальных РСК. Важно отметить, что дозозависимые эксперименты на основе нормальных клеток фибробластов человека не показали заметных признаков токсичности при дозе кофеиновой кислоты, использованной в этом исследовании (дополнительные рисунки 1A, B). Более поразительно то, что клоногенный потенциал (фиг. 2A) и доля клеток CD44 + CD133 + (фиг. 2B) были значительно подавлены обработкой кофеиновой кислотой дозозависимым образом.В соответствии с этими данными, относительные уровни экспрессии факторов, связанных с плюрипотентностью, также были значительно снижены в обработанных кофеиновой кислотой колоректальных РСК (рис. 2С). Мы также оценили влияние кофеиновой кислоты на миграционную способность колоректальных РСК с помощью анализа инвазии через лунки. Способность мигрировать через мембрану трансвелл (рис. 2D) и экспрессия матриксной металлопротеиназы 2/9 (MMP-2/9), которая играет решающую роль в регулировании миграции клеток и регенерации тканей (рис. 2E), заметно снизились в клетки, обработанные кофейной кислотой, по сравнению с клетками, не подвергавшимися обработке.Предыдущие исследования показали, что реорганизация актинового цитоскелета связана с миграцией клеток путем толкания или натяжения плазматической мембраны (Свиткина, 2018). Соответственно, окрашивание актинового цитоскелета фаллоидином выявило значительную корреляцию между обработкой кофеиновой кислотой и динамической перестройкой актиновых филаментов (дополнительный рисунок 2), предполагая, что заметно подавленная миграционная способность клеток, обработанных кофейной кислотой, может быть связана с перестройкой актиновых филаментов.Более того, эти ингибирующие эффекты кофейной кислоты на онкогенность могут быть связаны с потенциалом роста и апоптотическими процессами, включая популяцию с положительным аннексином V (Фигуры 2F, G). Кроме того, повышенная проапоптотическая фрагментация ДНК также наблюдалась с клетками, обработанными кофейной кислотой (дополнительная фигура 3).

Рисунок 1. Создание системы культивирования, формирующей трехмерную сферу, как модель культуры in vitro колоректальных РСК. Колоректальные сферы CSC были сформированы с использованием линии раковых клеток HCT116 после 1 недели культивирования сфер.Были перечислены размеры сфер более 100 мкм, с репрезентативным изображением сферы опухоли (A) . Результаты ПЦР в реальном времени, демонстрирующие изменения в экспрессии маркеров стволовых клеток KLFG, NANOG и SOX2 после 1 недели в сферической культуре по сравнению с таковыми в субконфлюэнтных монослоях (B) . Результаты анализа FACS, показывающие процент от общей популяции клеток, которая состояла из клеток CD44 + / CD133 + как в однослойной, так и в сферической культурах (C) .Клетки HCT116 сортировали методом двухцветной проточной цитометрии в соответствии с экспрессией CD44 и CD133. Точечный график разделен на два квадранта для CD44 + / CD133 + или CD44 / CD133 . Отсортированные популяции клеток HCT116 помещали в сферические культуральные чашки, и их клоногенные способности анализировали (D) . Результаты ПЦР в реальном времени, демонстрирующие изменения в экспрессии KLFG, NANOG и SOX2 как в CD44 + / CD133 + , так и в CD44 / CD133 субпопуляциях (E) .Результаты представляют собой средние значения ± SD трех независимых экспериментов.

Рисунок 2. Ингибирующее действие кофейной кислоты на клоногенность и плюрипотентность колоректальных РСК. Колоректальные РСК более устойчивы к радиации, чем опухолевые клетки большого объема. Таким образом, первичные сферы РСК подверглись облучению (2 Гр) и диссоциировали на отдельные клетки. Эти клетки впоследствии были повторно помещены на чашки для культивирования без дополнительного облучения для образования вторичных сфер CSC.Обработка кофейной кислотой ингибировала образование сфер колоректальных CSC (A) . Процент субпопуляций CD44 + CD133 + оценивали с помощью анализа FACS. Обработка клеток HCT116 кофейной кислотой (0,3 мМ) в течение 48 ч снижала процентное содержание клеток CD44 + CD133 + в общей популяции клеток (B) . Результаты ПЦР в реальном времени показывают изменения в экспрессии KLFG, NANOG и SOX2 в группах, обработанных как носителем, так и кофейной кислотой (C) .Клетки HCT116 обрабатывали кофейной кислотой в течение 24 часов, после чего влияние кофейной кислоты на способность миграции клеток оценивали с использованием анализа миграции через лунки (D) . Относительные уровни экспрессии ключевых позитивных регуляторов миграции клеток (MMP-2/9) оценивали с помощью вестерн-блоттинга (E) . Подавление жизнеспособности клеток обработкой кофейной кислотой в течение 72 часов определяли с помощью МТТ-анализа. Жизнеспособность клеток (%) рассчитывали как процент от контрольного носителя (F) .Цитотоксичность, вызванная кофейной кислотой, оценивали с помощью проточной цитометрии с использованием PE-меченного аннексина-V (G) . β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представляют собой среднее значение ± SD трех независимых экспериментов.

Кофейная кислота эффективно подавляет радиорезистентные колоректальные CSC

in vitro

Было высказано предположение, что колоректальные РСК связаны с устойчивостью к различным традиционным терапевтическим подходам, включая химиотерапию (Phi et al., 2018) и лучевой терапии (Arnold et al., 2020). В соответствии с этими исследованиями, мы наблюдали, что как размер сферического образования (рис. 3А), так и процент двойных положительных по CD44 / CD133 популяций (рис. 3В) в колоректальных ОСК были заметно увеличены в ответ на излучение 2 Гр. Кроме того, мы также обнаружили, что уровни экспрессии связанных с плюрипотентностью факторов, таких как KLF4, NANOG и SOX2, также были значительно увеличены после облучения 2 Гр (рис. 3C). Важно отметить, что обогащенное излучением колоректальное образование сферы CSC (рис. 3D), а также процентное соотношение CD44 / CD133 дважды положительных популяций (рис. 3E) были значительно снижены воздействием кофеиновой кислоты.Эти результаты показывают, что кофейная кислота эффективно воздействует на популяции колоректальных РСК, которые можно обогатить обычными химиотерапевтическими агентами и лучевой терапией.

Рисунок 3. Кофеиновая кислота эффективно подавляет вызванную лучевой терапией клоногенность и плюрипотентность колоректальных РСК. Колоректальные сферы CSC, полученные из клеток HCT116, подвергались облучению (2 Гр). Излучение значительно увеличило образование сфер CSC (A) . Процентное содержание субпопуляций CD44 + CD133 + оценивали с помощью анализа FACS.Воздействие радиации на клетки HCT116 (2 Гр) увеличивало процент клеток CD44 + CD133 + в общей популяции клеток (B) . Уровни мРНК KLFG, NANOG и SOX2 как в контрольных, так и в облученных (2 Гр) клетках измеряли с помощью ПЦР в реальном времени (C) . Первичные сферы ОСК подвергались облучению (2 Гр) и диссоциировали на отдельные клетки. Эти клетки впоследствии были перенесены на чашки для культивирования с добавлением кофейной кислоты или без нее (0.3 мМ) обработка с образованием вторичных сфер CSC. Кофеиновая кислота ингибировала образование устойчивых к радиации сфер в клетках HCT116 (D) . Обработка клеток HCT116 кофейной кислотой в течение 48 ч снижала процент радиационно-индуцированных клеток CD44 + CD133 + в общей популяции клеток (E) . Перечислены размеры сфер более 100 мкм и показано репрезентативное изображение сферы опухоли. Сокращения: TSFE — опухолевая сферообразующая эффективность.Результаты представлены в виде средних значений ± SD трех независимых экспериментов.

Аберрантная активация передачи сигналов Akt связана с множеством характеристик, связанных с CSC

Недавно было высказано предположение, что колоректальные РСК способствуют рецидиву и метастазированию опухоли (Prager et al., 2019). Таким образом, чтобы идентифицировать потенциальные гены-мишени, которые значительно активируются при метастатическом прогрессировании или рецидивирующих пациентах, мы провели анализ обогащения набора генов (GSEA), который представляет собой алгоритм для определения того, обогащены ли дифференциально экспрессируемые гены для конкретных физиологических условий, на основе клинических данных. колоректального рака с набором данных Seiber (GSEA14333).Интересно, что результаты GSEA показали, что компоненты передачи сигналов Akt были заметно обогащены при рецидивирующем колоректальном раке (рис. 4A). Кроме того, мы выполнили корреляционный анализ для проверки потенциальной патологической связи между передачей сигналов Akt и рецидивом колоректального рака с использованием репозитория набора данных Oncomine. Наборы данных генов были отфильтрованы по активности передачи сигналов Akt и возникновению или рецидиву колоректального рака. Результаты выявили сильную взаимосвязь между заметно усиленной сигнальной активностью Akt и возникновением или рецидивом колоректального рака (рис. 4B).Мы также наблюдали значительную корреляцию между повышенной сигнальной активностью Akt и более низкой выживаемостью или более высокой частотой рецидивов (рис. 4C). Кроме того, чтобы оценить состояние активации этих компонентов передачи сигналов Akt при рецидивирующем и единовременном колоректальном раке, мы исследовали профили экспрессии генов с использованием программного обеспечения для анализа пути изобретательности (IPA). Соответственно, положительные регуляторы передачи сигналов Akt, такие как Akt ( Z -оценка = 1,626, p = 1,18E – 06), IGF2 (Z-оценка = 2.025, p = 4,70E – 10), TGFA (Z-оценка = 2,251, p = 1,96E-04) и MAPK8 (Z-оценка = 2,231, p = 4.01E – 05). активируется при рецидивирующем колоректальном раке (рис. 4D). В соответствии с результатами клинической аналитики больших данных, наше иммуноокрашивание показало, что уровень экспрессии фосфо-Akt был значительно повышен в тканях с рецидивирующей опухолью по сравнению с таковым в тканях с неповторяющейся опухолью (рис. 4E). Для дальнейшего изучения корреляции между сигнальной активностью Akt и субпопуляциями колоректальных CSC мы проанализировали уровни экспрессии фосфо-Akt в сфероидообразующих CSC (Рисунок 4F) или в CD44 + CD133 + двойных положительных клетках (Рисунок 4G) .Эти результаты предполагают, что аберрантная активация передачи сигналов Akt может быть связана с множеством связанных с CSC характеристик, таких как радиоустойчивость, стеблевидность и канцерогенный потенциал колоректальных CSC.

Рисунок 4. Аберрантная активация передачи сигналов Akt связана с метастатическим прогрессированием колоректального рака. Различно экспрессируемые гены метастатического и неметастатического колоректального рака (когорта Seiber, GSE14333) применяли для анализа обогащения набора генов (GSEA).GSEA выявил сильно усиленную экспрессию передачи сигналов Akt при рецидивирующем колоректальном раке (A) . Доступные наборы данных о колоректальном раке были проанализированы с использованием репозитория наборов данных Oncomine (www.oncomine.org). После специальной фильтрации наборов данных колоректального рака, показывающих частоту рецидивов опухоли, мы обнаружили значительную корреляцию между усиленной передачей сигналов Akt и более высоким общим рецидивом (B) , а также более низким коэффициентом выживаемости (C) . Анализ вышестоящих регуляторов был выполнен с помощью программного обеспечения для анализа пути изобретательности (IPA) (http: // www.ingenuity.com) для прогнозирования состояния активации (активированного или подавленного) нескольких предполагаемых Akt-зависимых регуляторов в повторяющихся и разовых случаях. Профиль «Z-оценка» показывает, является ли конкретный предполагаемый регулятор значительно более «активированным», чем «подавленным». Анализ IPA выявил сильно увеличенную экспрессию факторов транскрипции, связанных с передачей сигналов Akt, таких как Akt, IGF-2, TGF-α и MAPK8, в рецидиве (D) . Ткани неметастатического и метастатического колоректального рака окрашивали антителом, специфичным для фосфо-Akt.Окрашивание DAPI использовали для маркировки ядер в каждом поле (E) . Результаты вестерн-блоттинга демонстрируют изменения активности передачи сигналов Akt через 1 неделю в сферической культуре по сравнению с таковой в субконфлюэнтных монослоях (F) . Клетки HCT116 сортировали методом двухцветной проточной цитометрии в соответствии с экспрессией CD44 и CD133. Точечный график разделен на два квадранта для CD44 + CD133 + или CD44 CD133 . Результаты вестерн-блоттинга демонстрируют изменения активности передачи сигналов Akt в субпопуляциях (G) как CD44 + , CD133 + , так и CD44 CD133 .β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представляют собой среднее значение ± SD трех независимых экспериментов.

Ингибирующие эффекты кофейной кислоты на колоректальные ОСК достигаются путем нарушения сигнального каскада PI3K / Akt

Чтобы исследовать лежащие в основе молекулярные механизмы ингибирующих эффектов, вызванных кофейной кислотой, мы оценили, достаточно ли обработки кофеином для активации сигнального каскада PI3K / Akt в колоректальных РСК. Важно отметить, что уровни фосфорилирования Akt были значительно снижены в клетках, обработанных кофейной кислотой, дозозависимым образом (фиг. 5A).Следовательно, разумно предположить, что кофейная кислота ингибирует самообновление и свойства, подобные стволовым клеткам, колоректальных CSCs, нарушая ось передачи сигналов Akt. В этом контексте, чтобы подтвердить, может ли передача сигналов Akt опосредовать индуцированные кофейной кислотой эффекты на колоректальные РСК, мы активировали или ингибировали передачу сигналов Akt с использованием специфического активатора Akt SC79 или ингибитора Akt V, соответственно. Действительно, индуцированные активатором Akt стимулирующие эффекты передачи сигналов PI3K / Akt были значительно ослаблены обработкой кофеиновой кислотой (фиг. 5B).Важно отметить, что ингибирующие эффекты кофеиновой кислоты на образование колоректальных CSC-сфер (рис. 5C) и процент от общей популяции клеток, состоящей из клеток CD44 + и CD133 + (рис. 5D), были успешно ослаблены активацией передачи сигналов Akt. . Кроме того, индуцированные ингибитором Akt ингибирующие эффекты передачи сигналов PI3K / Akt заметно усиливались при обработке кофеиновой кислотой (фиг. 5E). В соответствии с результатами активации передачи сигналов Akt, ингибирующие эффекты кофейной кислоты на образование колоректальных CSC-сфер (фиг. 5F) и процент от общей популяции клеток, состоящей из клеток CD44 + и CD133 + (фиг. 5G), были также синергизируется ингибированием передачи сигналов Akt.Эти результаты предполагают, что ингибирующие эффекты кофейной кислоты на самообновление и стеблеобразные свойства колоректальных РСК могут быть достигнуты путем нарушения оси передачи сигналов PI3K / Akt.

Рисунок 5. Активация или ингибирование передачи сигналов Akt модулирует эффекты, вызванные кофейной кислотой, на клоногенность и плюрипотентность колоректальных РСК. Результаты вестерн-блоттинга показывают изменения активности Akt в группах, обработанных как носителем, так и кофейной кислотой (A) .Колоректальные CSC предварительно обрабатывали активатором Akt SC79 (10 мкМ) в течение 24 часов перед обработкой 0,3 мМ кофейной кислоты в течение 48 часов, и изменения активности PI3K и Akt определяли с помощью вестерн-блоттинга (B) . Ослабляющие эффекты активации Akt на способность к формированию сфер, индуцированную кофейной кислотой, и процент субпопуляций CD44 + CD133 + оценивали с помощью сферообразующей культуры (C) и анализа FACS (D) , соответственно.Колоректальные РСК предварительно обрабатывали ингибитором Akt V (10 мкМ) в течение 24 часов перед обработкой 0,3 мМ кофейной кислотой в течение 48 часов, и изменения активности PI3K и Akt определяли с помощью вестерн-блоттинга (E) . Синергетические эффекты ингибирования Akt на способность к формированию сфер, индуцированную кофейной кислотой, и процентное содержание субпопуляций CD44 + CD133 + оценивали с помощью сферообразующей культуры (F) и анализа FACS (G) , соответственно.Перечислены размеры сфер более 100 мкм и показано репрезентативное изображение сферы опухоли. Сокращения: TSFE — опухолевая сферообразующая эффективность. β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представляют собой среднее значение ± SD трех независимых экспериментов.

Кофейная кислота подавляет индуцированное излучением самообновление и стеблеподобные свойства полученных PDTX колоректальных CSC

Модель колоректального рака с ксенотрансплантатом опухоли (PDTX), полученная от пациента, может быть создана путем прямой имплантации раковых тканей, полученных от пациентов с колоректальным раком, мышам с иммунодефицитом (Inoue et al., 2019; Йошида, 2020). Таким образом, модель PDTX является многообещающей моделью для решения проблемы несоответствия положительного терапевтического эффекта, наблюдаемого в культивируемых in vitro линиях раковых клеток , которые адаптировались к росту за пределами естественного микросреды опухоли, но отсутствие эффекта, наблюдаемого в гетерогенных опухолях у пациентов. . Здесь, чтобы дополнительно оценить активность и эффективность кофейной кислоты, мы успешно создали PDTX-модель колоректального рака человека. Важно отметить, что радиационно-индуцированное образование сфер CSC (фиг. 6A) и клетки CD133 + и CD44 + (фиг. 6B) были значительно ослаблены обработкой кофеиновой кислотой в двух моделях PDTX.Важно отметить, что уровни фосфорилирования Akt были значительно увеличены радиацией, и эти индуцированные облучением стимулирующие эффекты передачи сигналов PI3K / Akt были значительно ослаблены обработкой кофеиновой кислотой (фиг.6C) в двух моделях PDTX. Эти результаты предполагают, что радиационная резистентность и свойства стволовых клеток колоректальных РСК могут быть нарушены воздействием кофеиновой кислоты.

Рисунок 6. Кофеиновая кислота подавляет клоногенность и плюрипотентность колоректальных РСК, нарушая ось передачи сигналов Akt в модели PDTX.Схематическое изображение протокола эксперимента, описанного в разделе «Материалы и методы». Анестезированных 7-недельных мышей-самцов NSG инокулировали смесью 1: 1 Matrigel и 3 × 10 6 клеток HCT116 в подкожную ткань. Затем первичные сферы CSC, полученные от двух мышей PDTX, подвергали облучению (2 Гр) и диссоциировали на отдельные клетки. Эти клетки впоследствии пересадили на чашки для культивирования без дополнительного воздействия кофейной кислоты с образованием вторичных сфер CSC.Обработка кофейной кислотой успешно ослабила радиационно-индуцированное образование сфер колоректальных РСК (A) . Процент субпопуляций CD44 + CD133 + оценивали с помощью анализа FACS. Обработка клеток HCT116 кофейной кислотой (0,3 мМ) в течение 48 ч снижала процентное содержание клеток CD44 + CD133 + в общей популяции клеток (B) . Колоректальные сферы CSC, полученные от двух мышей PDTX, подвергали облучению (2 Гр) с дополнительным воздействием кофейной кислоты или без него, и активность передачи сигналов Akt определяли с помощью вестерн-блоттинга (C) .Перечислены размеры сфер более 100 мкм и показано репрезентативное изображение сферы опухоли. Сокращения: TSFE — опухолевая сферообразующая эффективность. β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представляют собой среднее значение ± SD трех независимых экспериментов.

Кофейная кислота эффективно подавляет способность к самовозобновлению и стеблеобразные свойства колоректальных CSC

in vivo

После наших экспериментов in vitro и мы дополнительно исследовали эффективность in vivo кофейной кислоты на онкогенез в ксенотрансплантатах опухолей человека.В соответствии с результатами in vitro , наблюдалось значительное уменьшение объема опухоли (фигура 7A) и веса (фигура 7B) у мышей, которым вводили кофейную кислоту (10 мг / кг, вводили внутрибрюшинно), что позволяет предположить, что лечение кофейной кислотой заметно нарушил потенциал колоректальных РСК по инициированию опухоли. Чтобы дополнительно определить, влияет ли лечение кофейной кислотой на свойства стволовых клеток колоректальных CSC in vivo , мы оценили процент субпопуляции CD44 + CD133 + клеток, полученных из опухолевого ксенотрансплантата.Соответственно, обработка кофейной кислотой успешно подавляла процент CD44 + / CD133 + субпопуляции in vivo в модели ксенотрансплантата (фигура 7C). Затем, чтобы определить, успешно ли кофеиновая кислота ингибирует сигнальный путь Akt in vivo , мы исследовали уровни экспрессии фосфо-Akt у мышей с обработкой кофеиновой кислотой или без нее. Как и ожидалось, результаты вестерн-блоттинга и иммуногистохимии показали, что обработка кофеиновой кислотой приводила к значительному снижению уровней фосфо-Akt в ксенотрансплантате опухоли человека (Фигуры 7D, E).Эти результаты свидетельствуют о том, что ингибирующие эффекты кофейной кислоты на самообновление и стеблеобразные свойства CSC in vivo могут быть достигнуты путем нарушения сигнального пути Akt, тем самым подавляя онкогенность колоректальных CSC.

Рисунок 7. Кофеиновая кислота подавляет клоногенность и плюрипотентность колоректальных РСК путем нарушения передачи сигналов Akt в модели ксенотрансплантата мышей. Схематическое изображение протокола эксперимента, как описано в разделе «Материалы и методы.Анестезированным 7-недельным самцам мышей NSG инокулировали смесью 1: 1 Matrigel и 3 × 10 6 клеток HCT116 в подкожную ткань. Мышей, несущих опухоли из клеток HCT116, лечили кофейной кислотой (10 мг / кг, внутрибрюшинно) или носителем (PBS). Объем опухоли (A) и вес (B) измеряли, как описано в разделе «Материалы и методы». Необработанные и обработанные кофейной кислотой ткани колоректального рака окрашивали антителами, специфичными для CD44 и CD133.Окрашивание DAPI использовали для маркировки ядер в каждом поле (C) . Относительные уровни активации передачи сигналов Akt в моделях ксенотрансплантата клеток HT29 оценивали с помощью вестерн-блоттинга (D) . Необработанные и обработанные кофейной кислотой ткани колоректального рака окрашивали антителом, специфичным для фосфо-Akt. Окрашивание DAPI использовали для маркировки ядер в каждом поле (E) . β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представляют собой среднее значение ± SD трех независимых экспериментов.

Обсуждение

В настоящее время широко признано, что продукты на основе природных ресурсов вносят значительный вклад в разработку лекарств и общественное здоровье с точки зрения лечения и / или профилактики различных заболеваний, включая рак (Ko and Moon, 2015; Wali et al., 2019) . В настоящее время эта стратегия оказалась очень успешной для многих терапевтических агентов или кандидатов в лекарственные средства, которые получены из растительных, микробных и полусинтетических соединений на основе шаблонов натуральных продуктов (Cheuka et al., 2016). Общеизвестно, что более 80% фармацевтических продуктов, включая различные противоопухолевые средства, получают из натуральных продуктов, таких как камптотецин из Camptotheca acuminate (Schaeppi et al., 1974; Gunasekera et al., 1979), эпиподофиллотоксины из Podophyllum peltatum (Krishan et al., 1975; Muggia and Gill, 1989), таксаны из Taxus brevifolia (Kingston et al., 1982), алкалоиды барвинка из Vinca major (Jordan et al., 1991) ), и так далее.Терапевтические эффекты многочисленных препаратов, полученных из натуральных продуктов, были оценены для лечения и профилактики многих различных типов рака (Aung et al., 2017; Mitra and Dash, 2018). Основными преимуществами использования продуктов на основе природных ресурсов, особенно для лечения рака, являются следующие: (а) минимальный или слабый побочный эффект; (б) их способность реагировать на многие типы рака; (c) сравнительно легкая доступность; и (d) смесь множества мощных противоопухолевых компонентов (Lee et al., 2016). Среди различных природных веществ кофейная кислота обладает противовоспалительным (Dos Santos и Monte-Alto-Costa, 2013), антиоксидантным (Sulaiman et al., 2014) и противоопухолевым действием (Lin et al., 2015). ). Действительно, Ван и др. (2005) показали, что кофейная кислота значительно индуцирует остановку клеточного цикла в фазе G0 / G1 и апоптическую гибель клеток, подавляя путь передачи сигналов Wnt / β-катенин в клеточной линии колоректального рака HCT-116. Xiang et al. (2006) также обнаружили, что кофейная кислота снижает способность к самообновлению различных клеток рака прямой кишки, таких как клетки HCT-116 и SW480, путем ингибирования сигнальных каскадов циклина D1 и c-myc.В этом контексте мы исследовали терапевтический эффект кофеиновой кислоты на колоректальные РСК, которые, как полагают, являются основным фактором, способствующим метастазированию и рецидиву опухоли (Dean et al., 2005). Действительно, кофейная кислота эффективно подавляла способность к самообновлению и стеблевидные свойства колоректальных CSCs in vitro, (Рисунки 2A-G) и in vivo (Рисунки 7A-E). Важно отметить, что в используемой здесь дозе кофейная кислота не проявляла явных признаков токсичности в дозозависимых экспериментах на основе нормальных человеческих фибробластных клеток (дополнительный рисунок 1).Кофеиновая кислота также эффективно подавляла радиорезистентные колоректальные CSCs in vitro (Рисунки 3A – E). Эти результаты показывают, что кофейная кислота эффективно воздействует на популяции колоректальных РСК, которые могут быть обогащены обычными химиотерапевтическими агентами и лучевой терапией с минимальной токсичностью.

Недавние исследования показали, что сигнальный путь PI3K / Akt часто не регулируется при колоректальном раке (Slattery et al., 2018; Zhong et al., 2019). Следовательно, аберрантная передача сигналов PI3K / Akt может быть важной клинической характеристикой колоректального рака и прогностическим маркером общей выживаемости (Malinowsky et al., 2014). Соответственно, наши данные показали, что передача сигналов PI3K / Akt была значительно выше при метастатическом колоректальном раке, чем при неметастатическом раке, хотя оба рака обнаруживают базальный уровень передачи сигналов PI3K / Akt (Figures 4A-E). Кроме того, передача сигналов PI3K / Akt была значительно выше в колоректальных РСК, чем в объемных раковых клетках (Фигуры 4F, G). Эти результаты предполагают, что нацеливание на колоректальные РСК с помощью ингибитора передачи сигналов PI3K / Akt может быть более эффективной терапевтической стратегией. Хотя недавно были разработаны ингибиторы передачи сигналов PI3K / Akt, такие как MK-2206 (Hirai et al., 2010), Перифозин (Bendell et al., 2011) и Afuresertib (Tolcher et al., 2015) эффективно ингибируют передачу сигналов PI3K / Akt в условиях in vitro , низкая активность или токсичность этих ингибиторов предотвратили их клиническое проявление. приложений (Mundi et al., 2016). Следовательно, срочно необходима разработка новых активных соединений, которые эффективно воздействуют на передачу сигналов PI3K / Akt, участвующую в колоректальном CSC-опосредованном онкогенезе и устойчивости. Кроме того, наши результаты анализа обогащения набора генов (GSEA) (рис. 4B), репозитория набора данных Oncomine (рис. 4C), анализа пути изобретательности (IPA) (рис. 4D) показали, что уровни экспрессии и сигнальная активность Akt были заметно увеличены. при рецидивирующем колоректальном раке.Интересно, что наши результаты вестерн-блоттинга показали, что уровни экспрессии общего Akt не изменились в более туморогенных сфероидообразующих CSC (фиг. 4F) или в CD44 + CD133 + двойных положительных клетках. Хотя наша гипотеза заключается в том, что экспрессия Akt и его сигнальная активность увеличиваются во время развития и метастазирования / рецидива колоректального рака, общие уровни Akt не изменились в более туморогенных сфероидообразующих РСК из-за следующего ограничения нашей модели культуры in vitro колоректальных CSC: наши in vitro модели колоректальных CSC представляют собой систему культуры, формирующую трехмерную сферу, или систему сортировки клеточных культур с предполагаемым CSC-маркером (CD44 и CD133) той же линии клеток рака толстой кишки (HCT116), уровни экспрессии которой равны общие Akt не были изменены во время 3D-культивирования или сортировки клеток.

Для дальнейшего изучения того, эффективно ли кофейная кислота ингибирует рост и / или способность к самообновлению колоректальных CSC посредством подавления передачи сигналов PI3K / Akt, мы совместно обрабатывали колоректальные CSC кофейной кислотой и активатором Akt SC79 или ингибитором Akt V, соответственно. Важно отметить, что ингибирующие эффекты кофеиновой кислоты на образование колоректальных CSC-сфер (рис. 5C) и процент от общей популяции клеток, состоящей из клеток CD44 + и CD133 + (рис. 5D), были успешно ослаблены активацией передачи сигналов Akt. .Наблюдение заметно синергетических ингибирующих эффектов на образование колоректальных CSC-сфер, обработанных кофейной кислотой и ингибитором Akt, дополнительно подтверждает эту интерпретацию (Фигуры 5F, G). Эти результаты предполагают, что ингибирующие эффекты кофейной кислоты на самообновление и стеблеобразные свойства колоректальных РСК могут быть достигнуты путем нарушения оси передачи сигналов PI3K / Akt.

Взятые вместе, наши результаты предполагают, что каскад передачи сигналов PI3K / Akt может способствовать самообновлению и радиоустойчивости, и что эта сигнальная ось может служить многообещающим прогностическим маркером и многообещающей терапевтической мишенью для колоректальных РСК.Насколько нам известно, это первое исследование, демонстрирующее, что кофейная кислота эффективно воздействует на популяции колоректальных CSC, подавляя рост и / или способность самообновления колоректальных CSC посредством передачи сигналов PI3K / Akt in vitro и in vivo .

Заявление о доступности данных

Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены институциональным наблюдательным советом больницы Гиль Университета Гачон (GCIRB-2013-66). Пациенты / участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании. Исследование на животных было рассмотрено и одобрено институциональным наблюдательным советом больницы Гиль Университета Гачон (GCIRB-2013-66).

Авторские взносы

H-YL и I-SH: концепция и дизайн.С-РП и С-РК: ​​разработка методики и проведение экспериментов. S-RP, S-RK, H-YL и I-SH: анализ и интерпретация данных. S-RP, H-YL и I-SH: написание рукописи. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Это исследование было поддержано Программой фундаментальных научных исследований через Национальный исследовательский фонд Кореи (NRF), финансируемым Министерством науки, ИКТ и планирования будущего (NRF-2018R1A2A3074613 и NRF-2020R1I1A2061281).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Этот отрывок был опубликован на 78-м ежегодном собрании Японской онкологической ассоциации; 2019 26-28 сентября Киото, Япония. Cancer Sci. 2019: 110 (Дополнение 1), P-3263.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcell.2020.585987/full#supplementary-material

Дополнительный рисунок 1 | IC 50 , концентрация, которая ингибирует 50% пролиферации фибробластов кожи человека и клеток HCT116. Подавление жизнеспособности клеток обработкой кофеиновой кислотой в течение 48 часов определяли с помощью МТТ-анализа на человеческих фибробластах кожи (A) и HCT116 (B) клеток. Жизнеспособность клеток (%) рассчитывали как процент от контроля носителя.Результаты представлены как среднее значение ± SD трех независимых экспериментов.

Дополнительный рисунок 2 | Подавляющее действие кофеиновой кислоты на миграционную способность клеток HCT116. Вызванная кофейной кислотой дезорганизация актиновых филаментов и морфологический переход клеток HCT116 визуализировались путем окрашивания актиновых филаментов фаллоидином. Окрашивание DAPI использовали для маркировки ядер в каждом поле.

Дополнительный рисунок 3 | Стимулирующее действие кофейной кислоты на апоптотическую фрагментацию ДНК в клетках HCT116.Апоптотическую фрагментацию и конденсацию ДНК, индуцированную кофейной кислотой, визуализировали с помощью окрашивания DAPI. Результаты представлены как среднее значение ± SD трех независимых экспериментов.

Сноски

Список литературы

Аль-Хадж, М., Вича, М. С., Бенито-Эрнандес, А., Моррисон, С. Дж., И Кларк, М. Ф. (2003). Перспективная идентификация онкогенных клеток рака молочной железы. Proc. Natl. Акад. Sci. США 100, 3983–3988.

Google Scholar

Алиболанди М., Абнос К., Анвари С., Мохаммади М., Рамезани М. и Тагдиси С. М. (2018). Направленная на CD133 доставка самособирающихся наночастиц ПЭГилированной карбоксиметилцеллюлозы-SN38 к колоректальному раку. Artif. Cells Nanomed. Biotechnol. 46, 1159–1169. DOI: 10.1080 / 216.2018.1446969

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Аунг, Т. Н., Ку, З., Корчак, Р. Д., и Адельсон, Д. Л. (2017).Понимание эффективности смесей природных соединений при раке через их молекулярный механизм действия. Внутр. J. Mol. Sci. 18: 656. DOI: 10.3390 / ijms18030656

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Айоб, А. З., и Рамасами, Т. С. (2018). Раковые стволовые клетки как ключевые факторы прогрессирования опухоли. J. Biomed. Sci. 25:20.

Google Scholar

Бенделл, Дж. К., Немунайтис, Дж., Вукеля, С. Дж., Хагенстад, К., Campos, L.T., Hermann, R.C., et al. (2011). Рандомизированное плацебо-контролируемое исследование фазы II перифозина и капецитабина в качестве терапии второй или третьей линии у пациентов с метастатическим колоректальным раком. J. Clin. Онкол. 29, 4394–4400. DOI: 10.1200 / jco.2011.36.1980

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бутелло, Р. С., Патель, Н. Дж., Шарон, К., Абдельфадиель, Э. И., Морла, С., Брофи, Д. Ф. и др. (2019). Уникальный несахаридный миметик гексасахарида гепарина ингибирует стволовые клетки рака толстой кишки посредством активации киназы p38 MAP. Мол. Рак Тер. 18, 51–61. DOI: 10.1158 / 1535-7163.mct-18-0104

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чен Х., Гуань Х., Лю Х. Д., Се Д. Ф., Ван Й., Ма Т. и др. (2018). p53 положительно регулирует экспрессию маркера раковых стволовых клеток CD133 в раковых клетках толстой кишки HCT116. Онкол. Lett. 16, 431–438.

Google Scholar

Чеука, П. М., Майока, Г., Мутаи, П., и Чибале, К. (2016). Роль натуральных продуктов в открытии и разработке лекарств против забытых тропических болезней. Молекулы 22:58.

Google Scholar

Corti, F., Nichetti, F., Raimondi, A., Niger, M., Prinzi, N., Torchio, M., et al. (2019). Ориентация на путь PI3K / AKT / mTOR при раке желчных путей: обзор текущих данных и будущих перспектив. Лечение рака. Ред. 72, 45–55. DOI: 10.1016 / j.ctrv.2018.11.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дос Сантос, Дж. С., и Монте-Альто-Коста, А. (2013). Фенетиловый эфир кофейной кислоты улучшает заживление ожогов у крыс за счет противовоспалительного и антиоксидантного действия. J. Burn Care Res. 34, 682–688. DOI: 10.1097 / bcr.0b013e3182839b1c

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Du, L., Wang, H., He, L., Zhang, J., Ni, B., Wang, X., et al. (2008). CD44 имеет функциональное значение для стволовых клеток колоректального рака. Clin. Cancer Res. 14, 6751–6760. DOI: 10.1158 / 1078-0432.ccr-08-1034

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эспиндола, К. М. М., Феррейра, Р. Г., Нарваез, Л. Е. М., Сильва Росарио, А. С. Р., Да Силва, А. Х. М., Сильва, А. Г. Б. и др. (2019). Химические и фармакологические аспекты кофеиновой кислоты и ее активности при гепатокарциноме. Фронт. Онкол. 9: 541. DOI: 10.3389 / fonc.2019.00541

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гунасекера С. П., Бадави М. М., Корделл Г. А., Фарнсворт Н. Р. и Читнис М. (1979). Растительные противораковые агенты X. Выделение камптотецина и 9-метоксикамптотецина из Ervatamia heyneana . J. Nat. Prod. 42, 475–477. DOI: 10.1021 / np50005a006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хаггар, Ф. А., и Боуши, Р. П. (2009). Эпидемиология колоректального рака: заболеваемость, смертность, выживаемость и факторы риска. Clin. Прямой кишки. Surg. 22, 191–197. DOI: 10.1055 / с-0029-1242458

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хираи, Х., Соутоме, Х., Накатсуру, Ю., Мияма, К., Тагучи, С., Tsujioka, K., et al. (2010). MK-2206, аллостерический ингибитор Akt, усиливает противоопухолевую эффективность с помощью стандартных химиотерапевтических агентов или лекарственных средств молекулярного таргетинга in vitro и in vivo. Мол. Рак Тер. 9, 1956–1967. DOI: 10.1158 / 1535-7163.mct-09-1012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ходжай, Г., и Мэннинг, Б. Д. (2020). Сеть PI3K-AKT на стыке онкогенных сигналов и метаболизма рака. Nat. Rev. Cancer 20, 74–88.DOI: 10.1038 / s41568-019-0216-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Иноуэ, А., Дим, А. К., Копец, С., Хеффернан, Т. П., Драетта, Г. Ф., и Каруго, А. (2019). Текущие и будущие горизонты моделей ксенотрансплантатов, полученных от пациентов, в трансляционных исследованиях колоректального рака. Раки 11: 1321. DOI: 10.3390 / Cancers110

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цзян, Н., Дай, К., Су, X., Фу, Дж., Фэн, X.и Пэн Дж. (2020). Роль пути PI3K / AKT в раке: структура злокачественного поведения. Мол. Биол. Rep. 47, 4587–4629. DOI: 10.1007 / s11033-020-05435-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джордан М.А., Троуэр Д. и Уилсон Л. (1991). Механизм подавления пролиферации клеток алкалоидами барвинка. Cancer Res. 51, 2212–2222.

Google Scholar

Йориссен, Р. Н., Гиббс, П., Кристи, М., Пракаш, С., Lipton, L., Desai, J., et al. (2009). Изменения экспрессии генов, связанные с метастазами, предсказывают плохие результаты у пациентов с колоректальным раком стадии B и C. Clin. Cancer Res. 15, 7642–7651. DOI: 10.1158 / 1078-0432.ccr-09-1431

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кабала-Дзик А., Жепецка-Стойко А., Кубина Р., Войтычка Р. Д., Бусман Э. и Стойко Дж. (2018). Кофеиновая кислота по сравнению с фенэтиловым эфиром кофейной кислоты в лечении рака груди. Клетки MCF-7: ингибирование скорости миграции. Integr. Рак Тер. 17, 1247–1259. DOI: 10.1177 / 1534735418801521

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kazama, S., Kishikawa, J., Kiyomatsu, T., Kawai, K., Nozawa, H., Ishihara, S., et al. (2018). Экспрессия маркера стволовых клеток CD133 связана с развитием опухоли при колоректальном канцерогенезе. Asian J. Surg. 41, 274–278. DOI: 10.1016 / j.asjsur.2016.12.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Копец, С., Фрейтас, Д., Калабрих, А. Ф., и Хофф, П. М. (2008). Адъювантная химиотерапия рака толстой кишки II стадии. Онкология 22, 260–270.

Google Scholar

Кришан А., Пайка К. и Фрей Э. III (1975). Цитофлуориметрические исследования действия подофиллотоксина и эпиподофиллотоксинов (VM-26, VP-16-213) на прохождение клеточного цикла лимфобластов человека. J. Cell Biol. 66, 521–530. DOI: 10.1083 / jcb.66.3.521

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, Х.Е., Нам, Дж. С., Шин, Дж. А., Хонг, И. С., Янг, И. Х., Ю, М. Дж. И др. (2016). Convallaria keiskei как новая терапевтическая альтернатива лечению рака слюнных желез путем нацеливания на миелоидноклеточный лейкоз-1. Голова Шея 38 (Дополнение 1), E761 – E770.

Google Scholar

Ли, Н. Х., Парк, С. Р., Ли, Дж. У., Лим, С., Ли, С. Х., Нам, С. и др. (2019). SERPINB2 — это новый индикатор туморогенности раковых стволовых клеток при нескольких типах рака. Раки 11: 499.DOI: 10.3390 / Cancers11040499

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Линь, Х.П., Линь, С.Ю., Хо, К., Сяо, П.Х., Су, Л.С., Цзян, С.С. и др. (2015). Фенетиловый эфир кофейной кислоты индуцировал остановку клеточного цикла и ингибирование роста андроген-независимых клеток рака простаты посредством регуляции Skp2, p53, p21Cip1 и p27Kip1. Oncotarget 6, 6684–6707. DOI: 10.18632 / oncotarget.3246

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

млн лет назад, X.Л., Сан, Ю. Ф., Ван, Б. Л., Шен, М. Н., Чжоу, Ю., Чен, Дж. У. и др. (2019). Сферообразующая культура обогащает стволовые клетки рака печени и обнаруживает стеароил-КоА-десатуразу 1 в качестве потенциальной терапевтической мишени. BMC Рак 19: 760. DOI: 10.1186 / s12885-019-5963-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Макена М. Р., Ранджан А., Тирумала В. и Редди А. П. (2020). Раковые стволовые клетки: путь к терапевтической резистентности и стратегии преодоления резистентности. Biochim. Биофиз. Acta Mol. Основы дис. 1866: 165339. DOI: 10.1016 / j.bbadis.2018.11.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Малиновский К., Ницше У., Янссен К. П., Бадер Ф. Г., Спат К., Дреколл Э. и др. (2014). Активация пути PI3K / AKT коррелирует с прогнозом при раке толстой кишки II стадии. Br. J. Cancer 110, 2081–2089. DOI: 10.1038 / bjc.2014.100

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Малли, К.О., Пиджон Г. П. (2016). Путь mTOR при раке желудочно-кишечного тракта, вызванном ожирением: потенциальные цели и клинические испытания. BBA Clin. 5, 29–40. DOI: 10.1016 / j.bbacli.2015.11.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Manic, G., Signore, M., Sistigu, A., Russo, G., Corradi, F., Siteni, S., et al. (2018). CHK1-таргетная терапия для истощения стрессированных репликацией ДНК, дефицитных по р53, гипердиплоидных стволовых клеток колоректального рака. Кишечник 67, 903–917.DOI: 10.1136 / gutjnl-2016-312623

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маршалл, Дж. Л., Халлер, Д. Г., Де Грамон, А., Хохстер, Х. С., Ленц, Х. Дж., Аджани, Дж. А. и др. (2007). Адъювантная терапия рака толстой кишки II и III стадии: согласованный отчет международного общества онкологов желудочно-кишечного тракта. Гастроинтест. Cancer Res. 1, 146–154.

Google Scholar

Митра, С., Даш, Р. (2018). Натуральные продукты для лечения и профилактики рака груди. Evid. На основе дополнения. Альтернат. Med. 2018: 8324696.

Google Scholar

Muggia, F. M., and Gill, I. (1989). Эпиподофиллотоксины: новые лабораторные и клинические данные. Curr. Opin. Онкол. 1, 206–212.

Google Scholar

Мунди, П. С., Сачдев, Дж., Маккорт, К., Калински, К. (2016). AKT при раке: новые молекулярные открытия и достижения в разработке лекарств. Br. J. Clin. Pharmacol. 82, 943–956. DOI: 10.1111 / BCP.13021

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Олейничак, А., Шаринска, М., Кмец, З. (2018). In vitro характеристика сфер, полученных из клеточных линий колоректального рака. Внутр. J. Oncol. 52, 599–612.

Google Scholar

Парк, С. Р., Чо, А., Ким, Дж. У., Ли, Х. Й. и Хонг, И. С. (2019). Новый сигнал эндогенного повреждения, CSF-2, активирует множество полезных функций мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани. Мол. Ther. 27, 1087–1100. DOI: 10.1016 / j.ymthe.2019.03.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Парк, С. Р., Ким, С. Р., Парк, К. Х., Лим, С., Ха, С. Ю., Хонг, И. С. и др. (2020). Sonic hedgehog, новый сигнал эндогенного повреждения, активирует множество полезных функций стволовых клеток эндометрия человека. Мол. Ther. 28, 452–465. DOI: 10.1016 / j.ymthe.2019.11.024

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Phi, L.Т. Х., Сари, И. Н., Янг, Ю. Г., Ли, С. Х., Джун, Н., Ким, К. С. и др. (2018). Раковые стволовые клетки (CSC) при лекарственной устойчивости и их терапевтическое значение при лечении рака. Stem Cells Int. 2018: 5416923.

Google Scholar

Quarni, W., Dutta, R., Green, R., Katiri, S., Patel, B., Mohapatra, S.S, et al. (2019). Митрамицин А подавляет рост колоректального рака, воздействуя на раковые стволовые клетки. Sci. Отчет 9: 15202.

Google Scholar

Риччи-Витиани, Л., Lombardi, D.G., Pilozzi, E., Biffoni, M., Todaro, M., Peschle, C., et al. (2007). Идентификация и распространение клеток, инициирующих рак толстой кишки. Природа 445, 111–115. DOI: 10.1038 / nature05384

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шеппи У., Флейшман Р. У. и Куни Д. А. (1974). Токсичность камптотецина (NSC-100880). Рак химиотерапия. Rep. 5, 25–36.

Google Scholar

Слэттери, М.Л., Маллани, Л. Е., Сакода, Л. К., Вольф, Р. К., Стивенс, Дж. Р., Самовиц, В. С. и др. (2018). Путь передачи сигналов PI3K / AKT: ассоциации miRNA с дисрегулируемой экспрессией генов при колоректальном раке. Мол. Канцерогенный. 57, 243–261. DOI: 10.1002 / mc.22752

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Су, П., Ян, Ю., Ван, Г., Чен, X., и Цзюй, Ю. (2018). Куркумин снижает устойчивость к иринотекану за счет индукции апоптоза раковых стволовых клеток в хеморезистентных раковых клетках толстой кишки. Внутр. J. Oncol. 53, 1343– 1353.

Google Scholar

Сулейман, Г. М., Аль-Амиери, А. А., и Багнати, Р. (2014). Теоретическая, антиоксидантная и цитотоксическая активность фенэтилового эфира кофейной кислоты и хризина. Внутр. J. Food Sci. Nutr. 65, 101–105. DOI: 10.3109 / 09637486.2013.832174

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Толчер, А. В., Патнаик, А., Пападопулос, К. П., Раско, Д. В., Бесерра, К. Р., Оллред, А.J., et al. (2015). Фаза I исследования ингибитора MEK траметиниба в сочетании с ингибитором AKT афуресертибом у пациентов с солидными опухолями и множественной миеломой. Рак химиотерапия. Pharmacol. 75, 183–189. DOI: 10.1007 / s00280-014-2615-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вали А. Ф., Маджид С., Расул С., Шехада С. Б., Абдулкарим С. К., Фирдоус А. и др. (2019). Натуральные продукты против рака: обзор фитохимических веществ из морских источников для предотвращения рака. Saudi Pharm. J. 27, 767–777. DOI: 10.1016 / j.jsps.2019.04.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wang, D., Xiang, D. B., He, Y. J., Li, Z. P., Wu, X. H., Mou, J. H., et al. (2005). Влияние фенэтилового эфира кофейной кислоты на пролиферацию и апоптоз клеток колоректального рака in vitro. World J. Gastroenterol. 11, 4008–4012. DOI: 10.3748 / wjg.v11.i26.4008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сян, Д., Wang, D., He, Y., Xie, J., Zhong, Z., Li, Z., et al. (2006). Фенетиловый эфир кофейной кислоты вызывает остановку роста и апоптоз клеток рака толстой кишки посредством передачи сигналов бета-катенина / Т-клеточного фактора. Противораковые препараты 17, 753–762. DOI: 10.1097 / 01.cad.0000224441.01082.bb

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ян, Л., Ши, П., Чжао, Г., Сюй, Дж., Пэн, В., Чжан, Дж. И др. (2020). Ориентация на пути раковых стволовых клеток для лечения рака. Сигнал. Transduct. Target Ther. 5: 8.

Google Scholar

Йошида, Г. Дж. (2020). Применение полученных от пациентов моделей ксенотрансплантатов опухолей и органоидов опухолей. J. Hematol. Онкол. 13: 4.

Google Scholar

Цзэн, Н., Хунбо, Т., Сюй, Ю., Ву, М., и Ву, Ю. (2018). Противораковая активность n-бутилового эфира кофейной кислоты против линии клеток карциномы кожи A431 проявляется посредством индукции апоптоза и ингибирования сигнального пути mTOR / PI3K / AKT. Мол. Med. Rep. 17, 5652–5657.

Google Scholar

Zhang, J., Zhang, Y., Cheng, L., Li, C., Dai, L., Zhang, H., et al. (2018). Обогащение и характеристика раковых стволовых клеток в сверхнизкой концентрации сыворотки и неадгезивной культуральной системы. Am. J. Transl. Res. 10, 1552–1561.

Google Scholar

Чжун, М. Э., Чен, Ю., Чжан, Г., Сюй, Л., Ге, В., и Ву, Б. (2019). LncRNA h29 регулирует сигнальный путь PI3K-Akt, действуя как цРНК и предсказывая плохой прогноз при колоректальном раке: интегративный анализ дисрегулируемой нкРНК-ассоциированной сети цРНК. Cancer Cell Int. 19: 148.

Google Scholar

Комплементарная опсонизация ВИЧ влияет на первичную инфекцию слизистой оболочки толстой кишки человека и последующую активацию Т-клеток

Слизистая оболочка половых органов и прямой кишки является начальным местом распространения ВИЧ, и вирус легче передается ректально из-за наличия единственного слоя эпителия и большого количества лимфоидных клеток, таких как ДК, макрофаги и Т-клетки, которые являются очень восприимчив к ВИЧ-инфекции.Наличие этих активированных иммунных клеток является причиной того, что желудочно-кишечный тракт является областью, наиболее пораженной ВИЧ (Brenchley and Douek, 2008). Первоначальные события ВИЧ-инфекции, поражающей слизистую оболочку человека, все еще плохо расшифрованы. В этом исследовании мы стремились выяснить ранние события ВИЧ-инфекции, связанные с колоректальной слизистой оболочкой, с использованием модели эксплантата колоректальной ткани человека и изолированных иммунных клеток из колоректальной слизистой оболочки человека. Ткани и клетки подвергались действию свободного и опсонизированного комплементом ВИЧ.Первоначальные ответы, индуцированные свободным ВИЧ в ткани слизистой оболочки, были мощными IFN типа I и противовирусными ответами, которые подавлялись, когда ВИЧ был опсонизирован комплементом. Воздействие ВИЧ модулировало профили иммунного транскриптома в слизистой оболочке через 24 часа в сторону более активированных Т-клеточных и Th27-зависимых ответов, которые частично отражались в ответах Т-клеток слизистой оболочки, наблюдаемых через 96 часов после воздействия ВИЧ в изолированных иммунных клетках слизистой оболочки. Наиболее сильные врожденные ответы наблюдались в тканях и изолированных клетках, подвергшихся воздействию F-HIV.Когда вирионы были опсонизированы комплементом, наблюдалась повышенная инфекция ВИЧ в изолированных и эмигрировавших ДК слизистой оболочки, тогда как у эмигрировавших Т-клеток у большинства людей были одинаковые уровни инфекции, независимо от типа контакта с ВИЧ. Воздействие F-HIV, увеличение количества CD4 + Т-клеток, экспрессирующих определенные негативные факторы иммунной контрольной точки. Воздействие ВИЧ и созданное микроокружение трансформировали CD4 + Т-клетки в более воспалительные популяции, то есть клетки Th27 и Th2Th27. Примечательно, что даже в CD8 + Т-клетках кондиционирующие эффекты, оказываемые воздействием ВИЧ и инфицированных ВИЧ клеток, особенно когда опсонизированы комплементом, изменяли их статус активации и уровни экспрессии перфорина.

Ранние передающие вирионы ВИЧ-1, которым удается установить продуктивную инфекцию in vivo, являются CCR5-тропными и обладают способностью инфицировать популяцию интегрин α4β7 + CD4 + CCR5 + Т-клеток в слизистой оболочке (Nawaz et al., 2011; Peachman et al. , 2015; Джозеф и др., 2015). В этом исследовании использовался ВИЧ-1 BaL, который является широко используемым лабораторным штаммом ВИЧ-1 и обычным инструментом для изучения ВИЧ-инфекции на моделях слизистой оболочки ex vivo (Merbah et al., 2012; King et al., 2013; Shen et al. ., 2012), и результаты показывают, что не было практически никаких различий в ВИЧ-инфекции CD4 + Т-клеток между штаммами ВИЧ-1 BaL и ВИЧ-основателем / передатчиком.Согласно Пэрришу и др., Вирионы, передающиеся тропически / основатели CCR5, эффективно захватываются ДК, происходящими из моноцитов, и передача CD4 + Т-клеткам выше, чем для вирионов, полученных от людей, инфицированных хроническим ВИЧ-1 (Пэрриш и др., 2013). Уровень инфицирования ВИЧ-1 в иммунных клетках слизистой оболочки и кожи варьируется в разных исследованиях (Tjomsland et al., 2013a; Bertram et al., 2019; Hladik et al., 2007; Introini et al., 2014; Merbah et al. , 2011).

Комплемент играет важную роль как в врожденном, так и в адаптивном иммунитете и играет важную роль в патогенезе многих хронических воспалительных заболеваний (Reis et al., 2019). В слизистой оболочке толстой кишки присутствуют факторы комплемента, которые производятся местным путем, например, эпителиальные клетки и секреция факторов комплемента в двенадцатиперстную кишку (Andoh et al., 1996; Jain et al., 2014; Lai A Fat et al., 1976). Вирионы ВИЧ-1, как из переданных изолятов-основателей, так и из хронических изолятов, а также размноженные из клеток человека, имеют молекулы, ингибирующие комплемент, такие как CD55 и CD59, встроенные в их липидную мембрану, которая останавливает каскад комплемента и защищает их от лизирования (Stoiber et al. ., 2008). Это приводит к образованию частиц ВИЧ-1, опсонизированных инактивированными фрагментами комплемента, такими как iC3b (Bajtay et al., 2004; Ellegård et al., 2014; Saifuddin et al., 1995). Лабораторный штамм ВИЧ-1 BaL, использованный в этом исследовании, активировал каскад комплемента, измеренный по продукции iC3b (Schumacher and Schreiber, 2015), и вирионы были опсонизированы iC3b. Помимо iC3b, должна быть фиксация C1q, особенно в группе CI-HIV, которая была опсонизирована сывороткой и антителами, специфичными к ВИЧ-1.Следовательно, C-HIV и CI-HIV должны отражать вирионы, передаваемые половым путем. Ранее мы исследовали ВИЧ-инфекцию слизистой оболочки шейки матки и обнаружили, что опсонизация комплемента увеличивает ВИЧ-инфекцию в эмигрирующих DC, но не в эмигрирующих CD4 + T-клетках (Tjomsland et al., 2013a). Влияние опсонизации ВИЧ на ткань слизистой оболочки толстой кишки или ДК слизистой оболочки, макрофаги и ответы CD4 + Т-клеток, насколько нам известно, ранее не было показано.Эффекты опсонизации комплемента, оказываемые на инфекцию и иммунные клетки колоректальной слизистой оболочки при воздействии опсонизированного комплементом ВИЧ, должны быть аналогичными в других тканях слизистой оболочки, поскольку в тканях / жидкостях организма присутствуют компоненты комплемента и регуляторы, но иммунологические / клеточные эффекты на индивидуальный иммунитет подмножества клеток должны отражать состояние активации резидентных клеток ткани, существующих в различных анатомических участках. Модели эксплантатов слизистой оболочки являются важными инструментами для изучения основных событий ВИЧ-1-инфекции и могут использоваться для тестирования новых противовирусных препаратов.Ограничение моделей ткани ex vivo состоит в том, что они не позволяют исследовать влияние ВИЧ на иммунные клетки, попавшие в очаг инфекции из кровообращения.

Наше предыдущее исследование ВИЧ-инфекции, затрагивающей ткань слизистой оболочки шейки матки, показало, что опсонизация комплемента увеличивает ВИЧ-инфекцию эмигрирующих ДК, но не эмигрирующих CD4 + Т-клеток (Tjomsland et al., 2013a).

Данные свидетельствуют о том, что комплементарная опсонизация ВИЧ (Ellegård et al., 2015; Эллегард и др., 2014; Svanberg et al., В стадии подготовки) и патогены, такие как Francisella tularensis (Dai et al., 2013), обладают способностью первоначально подавлять противовирусные и воспалительные реакции при нацеливании на рецептор комплемента 3, а в случае ВИЧ перестраивать сигнальный каскад, предоставление ВИЧ окна для инфицирования клеток-мишеней, что может быть объяснением повышенной инфекции. Следует отметить, что не все исследования опсонизации патогенов комплементом обнаруживают это подавление.

В нашем исследовании состояние дифференцировки памяти для CD4 + Т-клеток и CD8 + Т-клеток существенно не зависело от воздействия ВИЧ, а в колоректальной ткани CD45RA-CCR7- эффекторные Т-клетки памяти оставались доминирующим фенотипом Т-клеток. Уровни более терминально дифференцированной популяции CD45RA + CCR7- эффекторных Т-клеток памяти были выше в популяции CD8 + Т-клеток, чем в популяции CD4 + Т-клеток, что согласуется с данными периферической крови. Примечательно, что кондиционирование ВИЧ, особенно в F-ВИЧ и CI-группах, увеличивало частоту CD4 + Т-клеток, экспрессирующих CXCR3 + CCR6 +.Было показано, что этот тип клеток в крови очень чувствителен к инфекции ВИЧ-1 и обладает способностью к самонаводству в кишечнике (Gosselin et al., 2010). Кроме того, CXCR3 + CCR6 + CD4 + Т-клетки являются одним из типов клеток, количество которых снижается у ВИЧ-1-инфицированных людей даже при АРТ (Gosselin et al., 2010). При хронической инфекции SIV наблюдается повышение уровня CXCR3 + CD4 + T-клеток в крови, это также отражается на лимфатических узлах, где известно, что CXCR3 + T-фолликулярные хелперные клетки (Tfh) содержат высокие уровни вирионов (Velu et al., 2016).

Tbet изначально рассматривался как важный фактор, регулирующий Th2 CD4 + Т-клетки, обладающий способностью нарушать развитие как Th3, так и Th27, а также поддерживать подмножества CD4 + и CD8 + Т-клеток в памяти (Pipkin et al., 2010). Кроме того, Tbet обладает способностью регулировать несколько сетей транскрипции, таких как миграция Т-клеток и цитолитические сигнальные молекулы (Lazarevic and Glimcher, 2011), и было показано, что высокие уровни Tbet коррелируют с активацией перфорина и гранзима B CD8 + Т-клетками (Hersperger et al. al., 2010). Наши исследования обнаружили изменение популяций цитотоксических CD4 + и CD8 + Т-клеток в изолированных иммунных клетках слизистой оболочки после контакта с ВИЧ. Уровни CD4 + Т-клеток с экспрессией перфорина и / или гранзима В увеличивались, тогда как количество перфорин + CD8 + Т-клеток снижалось. Наблюдение за низкими уровнями CD8 + Т-клеток, экспрессирующих перфорин, после контакта с ВИЧ явно согласуется с нашими предыдущими данными, согласно которым способность NK-клеток убивать клетки-мишени снижалась при активации DC, подвергнутыми воздействию C-HIV.Кроме того, уровень перфорина в Т-клетках, примированных сокультурами клеток DC-NK, подвергнутых воздействию C-HIV и CI-HIV, был низким (Ellegård et al., 2018). Кроме того, это снижение экспрессии перфорин-экспрессирующих CD8 + Т-клеток может быть связано со снижением уровней Tbet и / или EOMES-положительных клеток, что указывает на то, что цитотоксическая функция CD8 + Т-клеток регулируется этими факторами транскрипции (Cruz-Guilloty et al., 2009 ). Если эти результаты действительно отражают обстоятельства in vivo в кишечнике во время начала ВИЧ-инфекции, эти активированные CD8 + Т-клетки со сниженной способностью к уничтожению будут неадекватными для борьбы с инфекцией.

Подавление Т-клеток, характеризующееся потерей эффекторных функций и повышенной экспрессией различных коингибиторных / отрицательных молекул контрольных точек, часто встречается при хронических вирусных инфекциях, таких как ВИЧ (Wherry and Kurachi, 2015). Наше исследование показало, что на начальных этапах контакта с ВИЧ на CD4 + Т-клетках было заметно увеличение экспрессии молекул отрицательных иммунных контрольных точек, особенно после контакта с F-ВИЧ, что указывает на то, что контакт с ВИЧ и инфицирование CD4 + Т-клеток приводит к образованию клеток с более высокий порог активации вместе с потенциально подавляющими способностями.Популяции CD8 + Т-клеток с отрицательными факторами иммунной контрольной точки не увеличивались, вместо этого в случае PD-1 и LAG3 наблюдалось снижение. Опсонизированный комплементом ВИЧ снижает уровни колоректальных CD8 + Т-клеток, экспрессирующих PD-1, что указывает на нарушение способности регуляции иммунных ответов. Недавнее исследование с участием людей с псориазом показало снижение экспрессии PD-1 на CD4 + и CD8 + Т-клетках, что предполагает, что это снижение, вероятно, может играть ключевую роль в хронической иммунной активации (Bartosińska et al., 2017).

При нелеченой ВИЧ-инфекции экспрессия CD38 Т-клетками крови является показателем нарушения Т-лимфоцитов и прогрессирования ВИЧ-инфекции (Liu et al., 2017). В нормальных условиях CD38 сильно экспрессируется на активированных Т-клетках в эксплантатах слизистой оболочки шейки матки, а низкая частота CD38 + CD4 + и CD8 + Т-клеток была связана со снижением репликации ВИЧ (Saba et al., 2017), что указывает на то, что экспрессия CD38 на Т-клетках слизистой оболочки либо поддерживает, либо является продуктом ВИЧ-инфекции. Кроме того, у ВИЧ-инфицированных лиц, не способных контролировать инфекцию, коэкспрессия CD38 и PD-1 на CD4 + и CD8 + Т-клетках может быть признаком активации Т-клеток (Shaw et al., 2011). На частоту CD8 + Т-клеток, выделенных из колоректальной ткани, экспрессирующей CD38, не повлияло воздействие ВИЧ, но уровни CD38 + CD8 + Т-клеток, экспрессирующих PD-1 и CD160, снизились, что, вероятно, должно снизить их порог активации. Недавнее исследование, посвященное изучению ВИЧ-инфекции эксплантатов слизистой оболочки шейки матки, показало, что низкое количество CD38 + CD4 + и CD8 + Т-клеток было связано со снижением репликации ВИЧ (Saba et al., 2017), что указывает на то, что экспрессия CD38 на Т-клетках слизистой оболочки, вероятно, способствует продуктивной ВИЧ-инфекции.Тем не менее, мы не оценивали частоту CD38 + CD4 + Т-клеток слизистой оболочки в этом исследовании, и, следовательно, мы не смогли сделать вывод, так ли это в нашем исследовании. В нашем предыдущем исследовании мы обнаружили повышенные уровни CD38 + CD4 + Т-клеток, что указывает на то, что CD4 + Т-клетки, примированные ДК, подвергнутыми воздействию C-ВИЧ, могут увеличивать скорость репликации ВИЧ (Ellegård et al., 2018).

Анализ транскриптома слизистой оболочки и фенотипическая оценка иммунных клеток слизистой оболочки ясно показали, что путь Th27 активируется после контакта с ВИЧ.В частности, факторы, активируемые F-HIV, участвуют в дифференцировке и поддержании ответов Th27 на уровне транскрипции, особенно для IL-16, IL-17A, IL-23, IFN-γ и IL-1β (Fernandes et al., 2017) и на уровне белка с IL-17A. Эта активация была подтверждена фенотипическим анализом, который четко показал увеличение популяции Th27 среди клеток, подвергшихся воздействию ВИЧ, то есть CD4 + Т-клеток, экспрессирующих RORγt и CCR6 +, а также увеличение продукции IL-17A.

В этом исследовании мы показали, что первичная ВИЧ-инфекция слизистой оболочки толстой кишки in vitro приводит к начальным сильным противовирусным ответам, когда индуцируется свободным вирусом, который частично защищает и создает среду с более низким уровнем инфекции по сравнению с опсонизированным комплементом ВИЧ.Опсонизация изменила профили транскриптомов, при этом свободный ВИЧ активировал различные врожденные и воспалительные пути на ранних стадиях инфекции по сравнению с ВИЧ, опсонизированным комплементом. Также очевидно, что среда, созданная опсонизированным комплементом ВИЧ с исходным подавленным противовирусным ответом в ткани слизистой оболочки и иммунных клетках, вносит вклад в более высокие уровни ВИЧ-инфицированных CD4 + Т-клеток, а затем в среду с более высокими воспалительными ответами. Кроме того, наблюдались повышенные частоты CD4 + Т-клеток с экспрессией PD-1 в сочетании с экспрессией Tbet / EOMES при воздействии свободного ВИЧ по сравнению с опсонизированным комплементом ВИЧ.В CD8 + Т-клетках экспрессия PD-1 снижалась после воздействия опсонизированного ВИЧ по сравнению со свободным ВИЧ в Tbet / EOMES + Т-клетках. Воздействие опсонизированного комплементом ВИЧ снижает уровни экспрессии перфорина CD8 + Т-клеток, тогда как экспрессия увеличивается на CD4 + Т-клетках после воздействия как свободного, так и опсонизированного комплементом ВИЧ. В заключение следует отметить, что опсонизация ВИЧ изменяет активацию сигнальных путей и клеток в слизистой оболочке толстой кишки таким образом, что способствует установлению вируса и создает среду, которая стимулирует активацию Т-клеток слизистой оболочки и воспалительные Т-хелперные клетки, и это может играть важную роль в Иммунопатогенез ВИЧ.

Синдром субакромиального соударения — Диагностика — Лечение

Синдром субакромиального соударения (SAIS) относится к воспалению и раздражению сухожилий вращательной манжеты, когда они проходят через субакромиальное пространство, что приводит к боли, слабости и уменьшению диапазона движений в плече.

SAIS охватывает диапазон патологий , включая тендиноз вращательной манжеты плеча, субакромиальный бурсит и кальцифицирующий тендинит. Все эти условия приводят к истиранию между коракоакромиальной дугой и сухожилием надостной мышцы или субакромиальной сумкой.

Чаще всего встречается у пациентов младше 25 лет, обычно у активных людей или у лиц, занимающихся физическим трудом , и составляет около 60% всех проявлений боли в плече, что делает эту патологию наиболее распространенной патологией плеча.

[старт-клиника]

Субакромиальное пространство

Субакромиальное пространство лежит ниже коракоакромиальной дуги, над головкой плечевой кости и большим бугорком плечевой кости. Коракоакромиальная дуга состоит (латеральнее медиальной) из акромиона, коракоакромиальной связки (перед акромиально-ключичным суставом) и клювовидного отростка.

Внутри субакромального пространства проходят сухожилия вращательной манжеты, сухожилие длинной головки двуглавой мышцы и корако-акромиальная связка, окруженные субакромиальной сумкой, которая помогает уменьшить трение между этими структурами.

Рис. 1. Связки плечевого сустава [/ caption]

[окончание клинической]


Патофизиология

Первопричину синдрома субакромиального соударения можно разделить на внутренние и внешние механизмы

Внутренние механизмы вовлекают патологии сухожилий вращательной манжеты из-за натяжения, в том числе:

  • Мышечная слабость : Слабость мышц вращающей манжеты может привести к мышечному дисбалансу, в результате которого плечевая кость смещается проксимально по направлению к телу
  • Чрезмерное использование плеча : повторяющиеся микротравмы могут привести к воспалению мягких тканей сухожилий вращающей манжеты и субакромиальной сумки, что приводит к трению между сухожилиями и коракоакромиальной дугой
  • Дегенеративная тендинопатия : Дегенеративные изменения акромиона могут привести к разрыву вращающей манжеты, что делает возможным проксимальную миграцию головки плечевой кости

Внешние механизмы включают патологии сухожилий вращающей манжеты из-за внешнего сжатия, такие как :

  • Анатомические факторы : Врожденные или приобретенные анатомические изменения формы и наклона акромиона
  • Мускулатура лопатки : Снижение функции мышц лопатки, особенно передней зубчатой ​​мышцы и трапеции, которые обычно позволяют плечевой кости проходить мимо акромиона при разгибании над головой, может привести к уменьшению размера субакромиального пространства
  • Нестабильность плечевого сустава : Любая аномалия плечевого сустава или слабость мышц вращающей манжеты может привести к сильному подвывиху плечевой кости, вызывая усиленный контакт между акромионом и субакромиальными тканями

Клинические особенности

Наиболее частым симптомом SAIS является прогрессирующая боль в передней верхней части плеча.Боль классически усиливается при отведении в пораженное плечо и уменьшается в покое, и может быть связана со слабостью и ригидностью, вторичными по отношению к боли.

Два общих признака обследования могут быть выявлены в случаях SAIS (особенно при субакромиальном поражении):

  • Тест на импинджмент по Нирсу — Рука помещается рядом с пациентом, полностью вращается внутрь, а затем пассивно сгибается, и дает положительный результат, если есть боль в переднебоковой части плеча.
  • Тест Хокинса — Плечо и локоть согнуты под углом 90 градусов, врач затем стабилизирует плечевую кость и пассивно вращает руку внутрь, и тест положительный, если боль в переднебоковой части плеча.

Дифференциальная диагностика

  • Мышечный разрыв (например, разрыв вращательной манжеты плеча, разрыв длинной головки двуглавой мышцы) — слабость сохраняется, несмотря на уменьшение боли в плече
  • Неврологическая боль (e.грамм. синдром грудного выхода, шейная радикулопатия, травма плечевого сплетения) — любая слабость, вероятно, будет связана с парестезией и / или болью, но слабость будет сохраняться, несмотря на уменьшение боли в плече
  • Синдром замороженного плеча (адгезивный капсулит или кальцифицирующий тендинит) — скованность сохраняется даже после облегчения боли
  • Акромиально-ключичная патология (например, акромиально-ключичный артрит, плечевой артрит) — проявляется более общей болью, а также слабостью и ригидностью, связанной с болью

Исследования

Диагноз соударения — клинический, , однако он часто подтверждается с помощью дополнительных изображений.

МРТ пораженного плеча часто является основой визуализации для SAIS. Особенности, которые можно увидеть у пораженных людей, включают образование субакромиальных остеофитов и склероза, субакромиальный бурсит, кистозные изменения плечевой кости и сужение субакромиального пространства.

Рис. 2. МРТ, показывающее субакромиальный удар с частичным разрывом сухожилия надостной мышцы [/ caption]

Менеджмент

Консервативное лечение в большинстве случаев является основой лечения.Пациенты должны иметь достаточную анальгезию, как правило, нестероидные противовоспалительные препараты, и регулярную физиотерапию, включая постуральную, стабилизацию, подвижность, растяжку и силовые упражнения.

Тем, кому требуется дальнейшее вмешательство, можно опробовать инъекций кортикостероидов в субакромиальное пространство. Пациенты должны быть обучены адекватным техникам разминки и мониторингу ранних признаков ухудшения импинджмента.

Хирургическое вмешательство

Если SAIS сохраняется более 6 месяцев без ответа на консервативное лечение , рекомендуется хирургическое вмешательство.

Хирургическое вмешательство особенно полезно у пациентов с ограниченным диапазоном движений и чаще всего является артроскопическим. Текущие хирургические методы включают:

  • Хирургическое лечение разрывов мышц , чаще всего надостной мышцы и сухожилия длинной головки двуглавой мышцы, что приводит к увеличению диапазона движений
  • Хирургическое удаление субакромиальной сумки , бурсэктомия, увеличение субакромиального пространства и уменьшение боли
  • Хирургическое удаление части акромиона , акриомиопластика, увеличение субакромиального пространства и уменьшение боли

Однако недавние данные рандомизированного хирургического исследования показали, что хирургическая декомпрессия не дает дополнительных преимуществ по сравнению с одной артроскопией, и действительно что преимущества хирургического вмешательства могут быть только результатом эффекта плацебо или усиленного послеоперационного физиотерапевтического лечения.


Осложнения

Осложнения SAIS включают дегенерацию вращающей манжеты и разрыв, адгезивный капсулит , артропатию разрыва манжеты и комплексный регионарный болевой синдром.

При ранней диагностике и оценке SAIS разрешается при консервативном лечении у 60–90% пациентов.

[старт-клиника]

Ключевые моменты

  • Синдром субакромиального соударения относится к воспалению и раздражению сухожилий вращательной манжеты плеча, когда они проходят через субакромиальное пространство
  • Проявляется прогрессирующей болью в передней верхней части плеча, обычно усиливающейся при отведении и уменьшающейся в покое
  • Диагноз является клиническим, однако МРТ может быть полезна для подтверждения диагноза и оценки дальнейших осложнений состояния
  • Основа лечения — консервативная, с ограниченными доказательствами в пользу хирургического вмешательства

[окончание клинического исследования]

Великих достижений в области медицинского мошенничества

Если на рубеже веков вам поставили диагноз люмбаго, тошнотворная лихорадка, черная рвота, чахотка, дряхлость, падающая болезнь, молочная нога, корабельная лихорадка, размягчение мозга, болезнь Св.Витас танец, траншея рта, водянка или не дай бог, расстройство духа, тогда у тебя были большие неприятности. «Современное» медицинское сообщество не только неправильно понимало большинство этих болезней, но и не знало, как их лечить… до тех пор, пока не появилось медицинское мошенничество.

На помощь

Столкнувшись с жизнью, полной бесконечной боли и страданий, многие люди, страдающие этими заболеваниями, прибегали к сотням необоснованных медицинских методов лечения — иногда они помогали, а иногда нет. Вот краткий список некоторых из наиболее популярных медицинских методов лечения и заявлений их авторов:

  • Магнитная кружка — Магнитные силы уже давно используются для лечения всего, от усталости до боли в пояснице.Фирма из Колорадо заявила в своем каталоге продуктов 1998 года, что их Магнитная кружка хранит материал между внешней поверхностью из нержавеющей стали и внутренней фарфоровой плиткой, который намагничивает любой содержащийся в ней напиток. За счет намагничивания жидкости между молекулами напитка создается пространство, повышая его щелочность. Щелочность напитков была отвергнута для облегчения абсорбции, минимизации обезвоживания и выведения токсинов из организма.
  • Вибрационное кресло Батл-Крик — Многие люди, которые наслаждаются тарелкой кукурузных хлопьев по утрам, знакомы с их изобретателем доктором Дж.Джон Харви Келлог из Батл-Крика, штат Мичиган. Доктор Келлог также разработал ряд терапевтических устройств, в том числе вибрационное кресло Battle Creek. После привязки пациента к стулу оно сильно тряслось и «стимулировало перистальтику кишечника», что было полезно при расстройствах пищеварения. Продолжительное лечение также использовалось для лечения различных заболеваний, от головных болей до болей в спине.
  • Детектор радиации Toftness — Если детектор радиации Toftness подозрительно похож на трубы и муфты из ПВХ, которые вы купили прошлым летом в Home Depot, то это потому, что это так.Пропуская через спину пациента трубку из ПВХ, снабженную недорогими линзами, хиропрактики улавливали пронзительный «писк», который означал, что устройство обнаружило области неврологического стресса, характеризующиеся высокими уровнями радиации. Устройство широко использовалось до 1984 года, когда Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов сочло его бесполезным.
  • Увеличитель груди с ножной операцией — В середине 1970-х годов силиконовые грудные имплантаты были еще в зачаточном состоянии, поэтому многие женщины, жаждущие большей груди, тратили 9 долларов.95 для ножного вакуумного насоса и серии чашек, обещавших «большую, упругую и красивую грудь всего за 8 недель». Как выяснилось, более 4 миллионов женщин были обмануты, купив устройство, которое оставило только синяки, даже если они купили весь комплект, в который входил флакон на 1 унцию капсул «Cleavage 6 Breast Enhancement».
  • Обезболивающее Crystaldyne — Одним из самых популярных болеутоляющих средств на рынке в 1996 году был не что иное, как воспламенитель газового гриля.Когда пациент нажимал на поршень, устройство посылало через кожу короткую вспышку искр и разряды электрического тока, чтобы вылечить головные боли, стресс, артрит, менструальные спазмы, боли в ушах, грипп и носовое кровотечение. После того, как компания попала под действие правил FDA в отношении медицинского оборудования, компания исчезла с тысячами долларов, заявив своим потребителям, что «их устройство было отправлено по почте».
  • Грелка железы простаты и Ротор Recto — Даже тот, у кого нет ни малейшего воображения, съежится от идеи ввести в прямую кишку зонд диаметром 4 с половиной дюйма, подключенный к синей лампочке и 9-футовой электрической лампе. шнур.Тем не менее, для тысяч предприимчивых потребителей обогреватель желез и ротор прямой кишки (это не корень) обещали самое быстрое избавление от проблем с простатой, запоров и геморроя.
  • The Radium Ore Revigator — В 1925 году тысячи неосведомленных потребителей потратили свои кровно заработанные деньги на глиняный сосуд, стенки которого были пропитаны низкосортной радиоактивной рудой. Не имея больше радиоактивного материала, чем тот, который находится на циферблате недорогих наручных часов, Revigator обещал укрепить «уставшую» или «увядшую» воду — «… причину болезни у ста девяти миллионов из ста десяти миллионов человек. Соединенных Штатов».
  • Relaxacisor — Для тех, кто ненавидел упражнения, но все же хотел гибкое, спортивное тело, Relaxacisor был ответом. Relaxacisor, выпущенный в начале 1970-х годов, поставлялся с четырьмя липкими подушечками, которые прикреплялись к телу и соединялись электродами с панелью управления. Устройство будет производить серию электрических ударов по телу, заменяя обычные упражнения — лежа на диване. Все 400 000 устройств были отозваны из-за того, что у потребителя возник риск выкидыша, грыжи, язв, варикозного расширения вен, эпилепсии и обострения ранее существовавших заболеваний.
  • Своевременное предупреждение — В 1888 году одним из самых неловких и изнурительных переживаний, которые мог вынести человек, был «любовный сон» или «ночное излучение».

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *